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科研学霸天团，48小时有问必答

问细胞复苏培养过程中，多久可以生长增倍？

loveliufudan

对于常见的细胞系，如HEK293、NIH3T3等，通常需要1-3天左右才能看到明显的生长增殖。对于一些较为敏感或者容易死亡的细胞，如原代细胞、淋巴细胞等，可能需要更长的时间来进行适应和恢复。需要注意的是，在细胞复苏后，生长增殖的速度和质量可能会受到多种因素的影响，如培养基成分、pH值、温度、CO2浓度等。为了获得较好的生长增殖效果，建议在细胞复苏后逐渐适应新的培养环境，并对培养基进行调整和优化。

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问细胞分瓶后第二天悬浮细胞多

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出现漂浮细胞有好几种可能第一是细胞死了，就漂起来了第二是在处理细胞的时候温度变化太大，建议预热培养液如果是用玻璃瓶培养的话改用塑料瓶试试可以半量换液

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问细胞长着长着就污染了，拉丝，然后用支原体检测试剂盒检测为阴性，很莫名其妙

loveliufudan

针对您所描述的情况，细胞长时间培养后出现污染，但支原体检测试剂盒检测为阴性，有可能有以下几个原因：支原体检测试剂盒的灵敏度不够高，未能检测出污染的支原体。虽然支原体检测试剂盒的灵敏度较高，但是有些污染可能存在变异性，检测不出来。污染可能是其他类型的微生物，而不是支原体。细胞污染不仅仅局限于支原体，可能存在其他微生物的污染，例如细菌、真菌等。细胞污染可能已经过度，支原体已经被细胞吞噬或其他细胞已经被

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问ST细胞和PK细胞传代时，怎样防止其聚堆生长？

sswei

原因:传代时细胞吹打不均匀，没有将细胞团吹散；吹打太用力造成细胞死亡，细胞死亡释放的DNA与其他细胞形成黏性的细胞团；细胞离心速度多大或者离心时间过长；细胞长的太满才进行传代操作。正确做法：消化前加入适量缓冲液对细胞进行清洗，清除死亡的细胞团和部分堆叠杂质；消化后吹打时上下左右吹打约10次左右，注意控制力度；确定细胞正确的离心条件，严格按条件执行；细胞汇合度在80%~90%即可传代。

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问做cck8时，为什么有趋势，但是孔颜色没有特别大的变化

loveliufudan

在您的实验中，虽然出现了趋势，但是孔颜色没有特别大的变化，可能是由于CCK-8试剂作用时间过短或者作用浓度不够高的原因。CCK-8试剂是一种细胞代谢指标，能够反映细胞代谢活性的变化，如细胞增殖、细胞毒性等。在使用CCK-8试剂时，通常需要根据细胞类型、培养条件和实验目的等因素进行优化，以确定最适宜的作用时间和浓度。如果出现趋势，建议您在进行实验前，根据细胞类型和实验目的等因素，合理控制细胞密度，避

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问自己平常的细胞冻存能不能不用FBS，为什么现在流行的无血清冻存液可以无血清

loveliufudan

在细胞冻存的过程中，通常需要使用冻存液来保护细胞的完整性和存活率。FBS作为一种常用的细胞培养液添加剂，能够提供细胞所需的营养物质和生长因子，同时还能够防止细胞因冷冻过程中的机械损伤而受到伤害。虽然使用FBS可以提高细胞冻存的存活率和质量，但并不是所有细胞都需要使用FBS。一些细胞在无血清条件下也可以存活并恢复生长，例如骨髓间充质干细胞、小鼠胚胎干细胞等。因此，在特定的情况下，可以尝试使用无血清的

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问悬浮细胞培养前几天很好，冻存到液氮里，在复苏前两天也还好，之后就贴壁了为什么？

loveliufudan

悬浮细胞通常是在无血清培养基中培养的，这种培养基通常不包含血清中含有的黏附因子，因此这些细胞不会黏附在培养皿的底部。当您将这些细胞冻存并重新复苏时，有可能在复苏过程中或者在接种到新的培养皿中的过程中，细胞会受到一些创伤或者应力。这些应力可能会导致细胞产生一些黏附分子或者表达一些黏附因子，这些因子可以使得细胞黏附在培养皿的底部，从而形成贴壁细胞。此外，如果培养皿表面没有很好的预处理，比如没有涂覆一些

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问细胞冻存到液氮里，复苏第二天长势很好，之后就越来越差为什么？

sswei

细胞复苏后次日没有及时换液去除死细胞,复苏时状态较差的细胞死亡,影响正常细胞生长。

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问请问细胞这样是染什么菌了？一直长的很慢，我就没有换液，后来就这样了

汤姆卜丽波

霉菌，之前我的细胞也是这种，超净台，培养箱彻底清洁一遍

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问细胞培养时有好多黑色碎片和游动的小黑点，怀疑是支原体污染，但检测后并没有。

sswei

很多会动的小黑点，只是发生布朗运动的细胞碎片。

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问放在液氮灌里的细胞会被液氮污染嘛？

sswei

因为存放标本或者细胞的过程中，取放提筒的过程中稍有不慎会导致部分物体随着提筒或者提篮的把手顺着把柄流入到液氮罐内，时间稍长不及时进行清洗，会造成沾付在内胆上，会污染细胞，出现杂菌、影响细胞的生长，因此当低温容器使用一段时间以后需要定期进行清洗，这样可降低细胞的污染。

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问迁移的细胞为什么会连成团？

汤姆卜丽波

可能是你一开始没有把细胞吹散所以后面会结块生长，这种其实计数是不准确的

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问养hep G2细胞一直不贴壁是什么原因？

sswei

可能原因: 1.胰蛋白酶消化过度 ;2.培养基pH值过碱(NaHCO3分解);3.细胞老化 ; 4.接种细胞起始浓度太低或太高。

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问久置培养基内出现黄色团块，加入双抗会有所改善，但以往在胎牛血清中也见过类似团块（培养基内加入血清使用）此团块一般是什么原因引起

loveliufudan

黄色团块在培养基中出现通常是由于细菌或真菌等微生物的生长引起的。这些微生物可以污染培养基，从而在其中生长形成团块。另外，如果培养基或添加的成分质量不佳或保存不当，也可能会导致团块的形成。在使用含有胎牛血清的培养基时，团块的形成可能是由于胎牛血清中的脂质、蛋白质或其他成分在培养条件下聚集形成的。这种现象在胎牛血清中比较常见，但也可能出现在其他血清或血清替代品中。加入双抗可以抑制一部分微生物的生长，从

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问细胞培养所使用的FBS需不需要灭活？

loveliufudan

通常情况下，使用的胎牛血清(FBS)不需要进行灭活处理。因为FBS作为培养基中的营养物质来源，其内含有的生物活性物质和细胞因子对于细胞生长和增殖是非常重要的。而进行灭活处理会使这些生物活性物质失去功能，从而影响到细胞的生长和生理活性。但是，如果需要进行一些特定的实验，例如检测病毒或者细胞因子等，需要保证实验体系的无菌和清洁，并排除FBS中存在的病原体或细菌的可能性，那么可以考虑使用经过灭活处理的F

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问大家给药的时候都用有血清的还是无血清的培养基呢？一直不知道哪个比较可靠，谢谢！

sswei

给药时用的是有血清的培养基,因为细胞正常生长需要FBS。

5 回答4280 围观

问Transwell一般多久固定比较合适啊？

sswei

Transwell一般固定的时间在24小时以内较合适。

3 回答911 围观

问细胞传代如何减少后代凋亡问题

loveliufudan

在细胞传代的过程中，后代细胞凋亡是一个普遍存在的问题。以下是一些可能有帮助的方法来减少后代细胞凋亡问题：1.控制细胞密度：在进行细胞传代时，应该控制细胞密度。如果细胞密度过高，会导致细胞营养不足和相互竞争，从而增加细胞死亡率。如果细胞密度过低，则会导致细胞无法良好地生长和分裂。因此，应该根据细胞类型和生长特性来确定适当的细胞密度。2.选择合适的培养基：合适的培养基可以提供必要的营养物质和适宜的生长

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问HepG2无法用DMEM培养基培养

橙汁儿青柠味

每个实验室的习惯不一样，它可能已经习惯了这个培养基。如果要更换培养基，建议在复苏的时候可以尝试一下

3 回答2457 围观

问请问组织运输过程中如何保存？

橙汁儿青柠味

最好是用干冰运输和保存，如果不方便最起码也要用冰袋

3 回答634 围观

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