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温度:室温23度。
小鼠麻醉断头,取组织后,放入低温PBS中,组织捣碎,用胰酶反复消化,终止消化后,取上清液,离心,放培养基中培养,隔天换液,并观察生长情况。
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原代小鼠心肌细胞胰酶消化过程2-3分钟即可。
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我们一般消化四分钟左右,提取组织可以用pbs冲洗的
loveliufudan
原代小鼠心肌细胞的胰酶消化时间需要根据实验情况和组织的大小、年龄等因素来决定,一般情况下,消化时间需要在30分钟至1小时左右,具体时间可以根据实验者的经验和组织状态进行调整。
如果您的组织在10分钟的消化过程中就已经出现了细胞死亡的现象,可能是消化过程过度或者消化过程中出现了异常,如温度过高或消化液的pH值不适宜等。建议您可以尝试在更短的时间内进行消化,例如5分钟,并且在消化过程中定期观察组织状态。
关于组织的处理,如果您需要提取原代小鼠心肌细胞,建议在取出组织后迅速用PBS等缓冲液进行冲洗,避免过度损伤组织。同时,胰酶消化的浓度和时间也需要控制在适宜的范围内。最后,建议您在进行细胞培养之前,对原代细胞进行筛选和检测,以排除可能存在的污染或异常细胞。
土井挞克树
可以用pbs冲洗,消化时间调整一下降低到6min