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科研学霸天团，48小时有问必答

问铺细胞后24小时内会漂浮较多细胞这部分上清需要收集么（不是凋亡产生的漂浮）

balalaLy

如果是没有做任何处理的情况下出现这种情况，可能就是细胞不行，可能是存在污染，或者是细胞消化时间太长

3 回答367 围观

问DAPI和7AAD有什么区别呢？

huarenqiang5

DAPI检测通道：最好用355nm激发，用440/40BP收集，也可以用405nm激发，450/50BP收集。 7-AAD检测通道：用488nm激发，用670/14BP收集。

3 回答4080 围观

问想问一下如果我的药物是活体细菌（2微米左右大小），细胞20微米左右，想流式检测细胞调往情况，前处理只能大致把细菌和细胞分开会

dxyc42u

洗涤阶段就把绝大多数细菌洗掉了。

3 回答184 围观

问cck8没有差异，流式检测凋亡后细胞早期凋亡率很高，什么原因？

balalaLy

这种结果算正常的，cck8能做出来的差异是属于晚期凋亡，早凋用流式可以检测出来，用cck8检测不出来。可以延长cck8的时间。

3 回答1183 围观

问想问问如果是改善的话，模型组10几，给药组几，这样的结果能用吗

feixue7758527w

初步看还是差异很大的，具体就要看有没有统计学意义了，现在没办法判断，做出结果，抓紧进行统计看看吧。

5 回答139 围观

问组织样品可以做这个凋亡实验吗？还是只能用细胞样品？

sswei

组织样品做凋亡实验比细胞样品做比较繁锁。

3 回答198 围观

问Ethidium Homodimer III 染色有什么要注意的吗

dxyc42u

注意事项1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。2. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4 回答472 围观

问老师好，请问加药24h后漂浮的死亡细胞较多，收集样本时是否需要同时收集上清液和贴壁细胞，还是只收集仍贴壁的细胞就行？

dxyc42u

只收集贴壁细胞，漂浮的细胞很可能是加药前生长状态不好的细胞

3 回答415 围观

问密度大概多少合适呢？有GFP标签的细胞不能做这个吧？

huarenqiang5

密度在1×105 个/ml至1.6×106 个/ml比较合适。

3 回答410 围观

问组织样品可以做这个凋亡实验吗？还是只能用细胞样品？

sswei

对各类组织样品的组织切片也可以用来做凋亡实验，但是比较复杂。

3 回答116 围观

问胰酶没法预热吧？

balalaLy

建议分装使用，使用前可以37°加热

4 回答3945 围观

问想请教小鼠精子检测凋亡精子分群是否能出现分群

huarenqiang5

小鼠精子检测凋亡分群一般都能够出现分群。

3 回答318 围观

问各位老师好，请问看不同温度处理后的精子（冻精）的凋亡率是看早调还是晚凋；还有就是用冻精做流式凋亡检测，样品本身的凋亡率是不是就高

sswei

低温冷冻解冻会使精子细胞发生严重的凋亡。

4 回答355 围观

问老师，请问最高药物浓度组坏死比例高，凋亡比例反而少，这个是合理的嘛？是因为该药物引起的细胞死亡不是以凋亡为主要死亡方式吗？

dxyc42u

合理，药物浓度太高的话导致的细胞死亡不是程序性的细胞凋亡

3 回答512 围观

问各位老师，请问细胞凋亡圈门后占比非常少，大概只有30%左右，这种情况怎么解决呀，还有测完之后细胞分群不是很明显，这是什么原因

huarenqiang5

可能是细胞本身问题或试剂盒或操作方面的问题导致。

3 回答445 围观

问慢病毒感染构建的稳转株对照细胞出现很大比例凋亡细胞但是培养过程中细胞状态很好这种现象可能的原因是什么

dxyc42u

很可能是凋亡检测出了问题，排查下

3 回答256 围观

问请问如果要跟其他表面marker一起染，染色顺序如何？

huarenqiang5

对于细胞质或者细胞核的 Marker，需要对细胞进行固定破膜/破核膜。在做胞质或胞核 Marker 染色实验操作时，需要先染细胞表面 Marker，再对细胞进行固定破膜，最后对胞内或核内 Marker 染色。此时细胞表面的 Marker 尽量避免使用串联染料，因为「固定」容易对串联荧光素造成影响。

4 回答623 围观

问请问annexin V与PI和与7AAD有何区别？

sswei

Annexin V分子量35KDa左右，是一种钙离子依赖性的磷脂结合蛋白，当细胞发生凋亡时，磷脂酰丝氨酸会从膜内外翻，Annexin V与外翻后的磷脂酰丝氨酸具有很高的亲和力，此时将FITC这种荧光蛋白标记在Annexin V上，便可以利用流式细胞仪进行检测。PI是核酸染料，不能穿过活细胞膜，当细胞膜出现破损时，PI可进入细胞并结合核酸。7-AAD （7-amino-actinomycin D）是

3 回答4261 围观

问做了细胞凋亡但是发现早凋和晚凋分不开，是否与实际用量与孵育时间相关

huarenqiang5

早凋和晚凋分不开，与实际用量和孵育时间都有关。

3 回答362 围观

问单标样品的制备方法？不同实验目的或者目标细胞，单标的制备是否有差异？

sswei

不同实验目的，单标制备有一点差异。

3 回答247 围观

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