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确定减少自发荧光的技术方法
FFPE组织中产生的自发荧光很可能是由于C = C键或C = N键的存在。为了解决这一问题,有些研究,利用硼氢化钠来还原C = C和C = N键以减少组织的自发荧光。然而,硼氢化物和与之类似的还原剂在中性pH环境下很不稳定。研究人员发现,尽管硼氢化钠可成功的减少组织中的一些自发荧光,但该方法的可重现性低、试剂处理难度很大。
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用于减少组织自发荧光的一种方法是光漂白。使用该方法时,组织切片长时间暴露于高强度UV辐射下,组织中的成分发生不可逆的光氧化作用。
还可以使用自发荧光淬灭剂来减少自发荧光
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--可以避开自发荧光的通道,选择发射光波长较长的荧光染料。可以尝试使用1 mg/ml 硼氢化钠清洗3次,每次10分钟,然后再进行后续的封闭和标记。或者用光漂白的方法,将组织切片长时间暴露于高强度UV辐射下,组织中的成分发生不可逆的光氧化作用。
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