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科研学霸天团，48小时有问必答

问从肿瘤组织中提取蛋白质的操作步骤是什么

loveliufudan

从肿瘤组织中提取蛋白质的基本步骤如下： 1. 组织处理：取得肿瘤组织后，需要尽快处理以防止蛋白质降解。在-80℃下快速冷冻的组织可以储存待用。 2. 制备细胞裂解液：根据需要提取的蛋白质类型，选择适当的细胞裂解液。通常，裂解液包含了能破坏细胞膜和核膜的化合物（如Triton X-100，NP-40等），并且还有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂以防止蛋白质降解和脱磷。 3. 组织均质化：将肿瘤组织与裂解液

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问冻存管里有液氮对细胞影响大吗

是TTT

有影响，很可能存在支原体污染，也可能有真菌和细菌污染

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问在溃疡性结肠炎中，IL22的含量是下降，为什么P-STAT3的含量是上升。

是TTT

需要查阅文献，溃疡性结肠炎中是否还存在其他因子调控stat3，因为疾病的发生是多因素的，il22含量下降，p-stst3不降反升，说明还可能存在其他负调控stat3的因子，它们的作用比il22强，导致p-stat3反而上升

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问huh7细胞不贴壁，但生长很快，请问有人知道这是什么原因吗？

烧伤科常医生

可能是培养基的问题，建议更换培养基，再有最好用进口的培养瓶

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问【求助】

feixue7758527w

我觉得就是死细菌的，死细菌没有活力，加上一些代谢废物，就会沉淀在底部的。

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问求助，细胞污染了

feixue7758527w

这个有很长的丝状物，我觉得真菌感染的可能性比较大的。

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问NK细胞培养计数

sswei

NK细胞铺孔用96孔，一般一周换液。

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问求助肿瘤细胞灭活方法

sswei

丝裂霉素C可使细胞的DNA解聚，同时阻碍DNA的复制，从而抑制肿瘤细胞分裂。灭活肿瘤细胞药物有博来霉素、卡瑞利珠单抗、甲苯磺酸索拉非尼等药物

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问细菌与细胞共培养难题

dxy_v0tkrzi0

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问Western blot 显影为什么背景这么黑

loveliufudan

以下是一些可能的原因： 1. 抗体交叉反应：背景黑暗可能是由于使用的抗体与非特定的蛋白质结合，导致背景信号增加。确保您的抗体具有高度特异性，并进行适当的阴性对照。 2. 非特异结合：背景黑暗可能是由于非特异性的蛋白质与二抗或其他试剂结合，产生非特异的信号。优化和调整二抗的浓度和处理条件可能有助于减少这种结合。 3. 过度的洗涤步骤：洗涤步骤是去除非特异性结合的关键。如果洗涤步骤不充分，未结合的试剂

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问cck8实验，测OD值前更换培养液（原培养液中有还原性物质），需要用PBS清洗几次？怎么轻缓冲洗？

dxyc42u

用pbs洗一次即可，加入pbs后挺轻晃动培养板就行

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问求助|肿瘤浸润淋巴细胞提取

huarenqiang5

从乳腺癌实体组织中提取肿瘤浸润淋巴细胞，建议用percoll40/80浓度试试。

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问关于测定线粒体功能方法的求助帖

loveliufudan

要评估特定心脏病患者的线粒体功能，可以使用以下方法来测定线粒体相关功能： 1. 呼吸链酶活性测定：通过测定心肌组织或血液样本中的呼吸链酶活性，如线粒体复合物I、II、III、IV和V的活性，可以评估线粒体的氧化磷酸化功能。 2. 线粒体膜电位测定：使用荧光探针（如JC-1或TMRE）来测量线粒体膜电位，线粒体膜电位的降低可能表示线粒体功能异常。 3. ATP产量测定：通过测量心肌组织或血液样本中的

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问wnt/b-catenin通路的疑问

晓雨知春来

你看的这篇文章提到s100A4能够增加磷酸化B-catenin的水平，而且S100A4又能增强Wnt/Bcatenin信号通路，看起来确实有些矛盾。但是需要注意的是，B-catenin的磷酸化不一定都会导致它的降解。在某些情况下，B-catenin的磷酸化可能会改变它的亚细胞定位或与其他蛋自的相互作用。可能的解释是S100A4增加的磷酸化B-catenin并不是导致其降解的那种，反而可能是有利于B

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问荧光分析

晓雨知春来

通常可以在图像处理软件中，如ImageJ或FIJI完成:1.首先，打开你的图像2.然后，使用工具栏上的选择工具( 比如矩形、圆或自由形状等)来选择你感兴趣的区域。3.一旦你选定了区域，你可以使用”Analvse”或”Measure”功能来测量选定区域的荧光强度。这通常会给出一个数值，表示该区域的平均荧光强度。4.通常，你需要选定背景区域并测量其荧光强度作为基线，然后从你感兴趣区域的测量结果中减去这

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问胶质细胞吞噬研究

huarenqiang5

传代方法有两种:一种方法可以直接用细胞刮子刮下细胞，接种到新的培养皿中；另一种方法就是用0.25%胰酶+0.04%的EDTA消化后，进行传代。

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问裂解组织

dxyc42u

RIPA缓冲液中剪碎组织后，转移到匀浆器中，加足5ml RIPA缓冲液，研磨20min.

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问细胞活力

sswei

MTT和CCK-8原理基本是一致的，但存在如下的区别：1、常规操作的MTT法受药物本身的颜色、培养基的颜色、血清的浓度使结果的变异较大。如采用MTT改进法将有效的降低试验的飘变率。2、CCK-8是最近新出现的方法，它操作简便、结果变异率小。对悬浮细胞的测定有它独到的地方！CCK-8为黄色的，要采用无酚红的培养基进行测量！所以两者测量时出现不一致现象。

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问大鼠PBMC分离能不能用中性粒细胞分离液

loveliufudan

中性粒细胞分离液分离出的PBMC和淋巴细胞分离液分离出的PBMC的主要区别在于他们的成分。淋巴细胞分离液一般会分离出更纯净的淋巴细胞和单核细胞，而中性粒细胞分离液分离出的PBMC可能包含更多类型的细胞，包括某些没有完全分离的中性粒细胞。另外，这两种方法的细胞恢复率和活性也可能会有所不同，具体可能取决于样本的类型和状态，以及分离程序的具体操作。因此，你应该根据你的实验目标和需要来选择适合的分离液和分

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问求助细胞实验大佬

feixue7758527w

细胞扎针灸肯定是不可能的，你只能用电刺激来模拟针灸，电灸吧。具体要去网上找找。

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