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科研学霸天团，48小时有问必答

问购买的原代细胞是不是不建议冻存呀？卖细胞的公司说不建议冻存，有的说可以冻存～那不冻存，原代细胞就无法做完实验怎么办？

loveliufudan

关于原代细胞是否可以冻存,我的建议是:1. 理论上大多数原代细胞都可以冻存,但部分细胞表型可能会有变化。2. 不建议冻存的原因可能是冻存存活率不高,公司想确保细胞活性。3. 如果打算冻存,需要优化冻存保护剂配方和复苏条件,提高存活率。4. 冻存前应测试细胞活力良好,避免对试验影响。5. 如果无法冻存,可以分批次订购原代细胞,根据实验进度使用。6. 也可以采用扩增传代的方法,从少量原代细胞扩增储备使

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问小样本是否可以用均值表示药代动力学参数?

sswei

小样本情况下可以使用T分布来检验。但是思路是这样的——对样本均值进行假设检验时，在总体方差已知时使用Z检验，总体方差未知时需要使用样本方差来代替总体方差，所以才会使用T检验；而这些的前提都是样本均值服从于正态分布；而样本均值服从正态分布的前提是中心极限定理，而这个定理需要样本量足够大（也就是大样本）。所以大样本是满足T检验和Z检验的基础，而不是区分T和Z的条件（区分的条件是总体方差是否已知）。

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问coip非特异性结合

loveliufudan

建议可以从以下几个方面进行优化:1. 调整洗涤条件,增加洗涤次数,也可以试试高盐洗涤液减少非特异性结合。2. 检查所用抗体,高质量抗体特异性更好,可以减少背景。可以试试不同克隆或品牌的抗体。3. 增加封闭蛋白量,一般3-5% BSA或脱脂奶粉,封闭1-2小时。这可以有效降低背景。4. 如果仍存在问题,可以使用Preclearing步骤,先让样品与控制IgG或蛋白A/G球孵育,洗去非特异性结合后再免

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问PB缓冲液pH可以调到9.6吗？

汤姆卜丽波

可以调的，你们实验室平时用什么调就用什么调，我们一般用氢氧化钠和硫酸

3 回答1470 围观

问细胞实验每组几个复孔？cCk8需要复孔吗

巴啦啦能量-wy

一般至少三个，cck8可以多做几个，增大重复性

9 回答2733 围观

问原代细胞只能传2-3代的话，请问这两到三代的细胞活力会变化吗？也就是这两到3代都是可以认为是同一性质的细胞吗？

huarenqiang5

是的，他们是同一性质的细胞，能够正常传代、正常分裂繁殖的细胞，活力一般情况下不会变化。

6 回答545 围观

问我的实验大概最快需要一个月才能做完，如果是购买的原代细胞只能传2-3代，能保证完成实验吗？会不会还没做完就挂了？

huarenqiang5

实验成功与否与许多因素有关，建议你先自己把各个环节都考虑进去自己先估算一下看看在一个月时间内完成实验，这样的话比较可靠，然后决定。

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问某皂苷R的购买问题：我先买了一部分做预实验，那么正式实验再买的皂苷R能保证买的是同一批次吗？网上说每次买的皂苷R不完全？

huarenqiang5

正式实验如果想买同一批次的，建议在做预实验买的时候就得先和客服沟通好，这样下次买的时候再联系该客服进行购买比较妥当。

5 回答268 围观

问为什么用100—500umol双氧水给细胞1h造模，完全培养基培养24h，cck8测活性，没有明显剂量效应，有的浓度高的还促进。

loveliufudan

可能有以下几个原因:1. 双氧水的处理时间太短。1小时可能没有充分发挥双氧水的细胞毒性作用。可以考虑延长处理时间,例如24小时。2. 双氧水在完全培养基中的不稳定性。双氧水在含有蛋白质、氨基酸、维生素等成分的培养基中会快速分解,其细胞毒性效应可能被减弱。可以考虑在无血清的培养基中进行处理。3. 双氧水促进了细胞增殖。低浓度双氧水可能作为Reactive oxygen species (ROS)起到

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问比色法检测MDA，为啥有些选择分光光度计？有的选择酶标仪。

loveliufudan

对比色法检测MDA,选择使用分光光度计或酶联免疫吸附试验仪(ELISA)的主要原因如下:1. 分光光度计优点:操作简便,能特异性检测MDA。缺点:试剂稳定性较差,存储条件需严格控制。适用场景:需要快速定性或半定量检测MDA。2. 酶联免疫吸附试验仪(ELISA)优点:灵敏度高,稳定可靠。缺点:需要配套抗体,操作步骤较复杂。适用场景:需要高灵敏精确的MDA定量检测。综合来看,如果仅需要定性或半定量

3 回答742 围观

问肠细胞复苏之后，镜下观察，出现以下物质，是死细胞还是污染了？

feixue7758527w

细胞太密了，丝状物应该是污染，不应该是细胞的东西，应该是什么东西掉进去了。

3 回答270 围观

问准备养原代脂肪细胞，请问在培养，传代，铺板及诱导分化原代脂肪细胞有什么需要注意和小心的点，应该采取哪些措施防止，谢谢！

sswei

传代培养的注意事项1）离体培养的细胞生命力比较脆弱，因此传代时细胞没有生长到培养瓶底壁面积的 80%以前，不要急于传代。2）首次传代，由于原代培养中各种类型的细胞常混杂生长，传代时不同细胞又不同的消化时间，因而要根据需要注意及时处理。3）对贴壁细胞消化后的吹打过程要有序进行，要从一边开始到另一边结束，尤其是器皿的四角处，确保瓶皿底壁各处的细胞都被吹打脱离。吹打时动作不宜过猛，吹出液体的力度要

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问细胞给药前都需要饥饿处理吗。

麻黄连翘赤小豆

一般都要12-24小时饥饿处理，对药物会更敏感

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问原代嗅鞘细胞培养过程中，可以使用FGF2促进嗅鞘细原代嗅鞘细胞培养过程中，可以使用FGF2的同时使用Rogaratinib吗？

晓雨知春来

可以使用FGF2的同时使用Rogaratinib。

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问原代嗅鞘细胞培养时，有没有什么药物可以特异性促进嗅鞘细胞生长，或者特异性抑制嗅成纤维细胞生长的药物

sswei

碱性成纤维细胞生长因子有促进噢鞘细胞生长作用。

3 回答243 围观

问原代嗅鞘细胞培养过程中，FGF2能促进嗅鞘细胞生长吗？

晓雨知春来

原代嗅鞘细胞培养过程中，FGF2能促进嗅鞘细胞生长。

3 回答351 围观

问完全成熟的DC细胞贴壁吗？

dxyc42u

DC细胞在生长过程中逐渐由贴壁生长变成半悬浮, 悬浮状态生长。

3 回答2082 围观

问小鼠胸主动脉内皮细胞好养活吗？

loveliufudan

以下是一些建议来提高原代小鼠胸主动脉内皮细胞的存活和培养成功率： 1. 保持无菌操作：在培养过程中，始终确保无菌操作。在更衣柜下进行操作，使用无菌培养器皿、耗材和培养试剂。 2. 注意供应商建议：根据供应商提供的说明书或建议，了解购买的原代细胞的特性、存储条件和培养建议。遵循供应商的指导进行操作和培养。 3. 快速转移和适当处理：购买细胞后，尽快进行转移和处理。按照供应商的推荐方法和培养基组合处理

3 回答413 围观

问有没有推荐的SYTO green I 和PI 的牌子呢

dxyc42u

我用过索莱宝的，效果还不错价格也实惠

3 回答492 围观

问BJ细胞测给药24h后cck8时细胞活力时，吸光值低（0.15-0.4）之间，要延长给药时间，还是加大接种量比较好

龙大人驾到

如果BJ细胞在给药24小时后CCK-8检测的吸光值较低（0.15-0.4），说明细胞活力下降，可能是由于药物的细胞毒性导致的。此时，为了提高细胞活力，可以尝试以下措施：1. 延长给药时间。如果给药时间较短，可以考虑延长给药时间，以便细胞有更多的时间来适应药物，或者药物的作用可以更充分地发挥。2. 减少药物浓度。如果药物浓度过高，可以考虑降低药物浓度，以减轻细胞对药物的负担，从而提高细胞的生存率和活

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