实验问答21,860,531 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问曝光问题求助，背景很黑条带几乎看不到，是怎么回事呢

喵喵喵柏

请贴一个图片背景黑可以用软件调整，需要区分是多克隆抗体，还是封闭不好，还是没有调整好呢？

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问什么叫做汇片，不是很理解，一般不是说的不是细胞的密度吗

dxy_gwrp7ndq

细胞在瓶中增殖时,出现在细胞间的粘连和排列状态,达到某种状态用汇合度%表示,一般达到70%-80%左右可以分瓶

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问从细胞中提取出的线粒体如何计数？

天一湖医者

不同种类的试剂盒提取的都不同。一般产品包装盒中都附有说明书的。小量质粒提取试剂盒 100-500ng/uL；一般能有300ng/uL

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问STC-1细胞和NCI-H716细胞哪种更好养活

迟C迟

个人觉得STC-1细胞更好养活，NCI-H716细胞株是悬浮细胞株，少部分会贴壁，贴壁后生长缓慢。

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问请问间充质干细胞培养时，细胞（汇）融合度怎么判断？

bamboopiggy

就是细胞覆盖培养皿底部的面积百分比，间充质一般到80%的时候才处理。

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问为什么我做出来的是这样呢

喵喵喵柏

除了其他人说的之外，还需要注意这个背景不是很干净，建议优化一下封闭条件，比如室温下延长时间，或者使用牛奶封闭

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问southetn blot 最后成像时，只有maker是咋回事呀，这个实验失败了好多次，心态崩了。

bamboopiggy

你下次加个阳参吧，如果阳参能出来，说明你的实验步骤没问题，如果阳参都出不来，你可能需要改你的实验方法。

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问hela细胞出现很多细小黑色颗粒

whilt-shirt

如果是用的高糖DMEM有可能会出现这种情况，可以更换1640试试

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问生物成像中细胞成像的应用

vae1476

可以通过心肌细胞激光共聚焦扫描显微图像进行观察

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问小鼠附睾脂肪的组织染色需要特殊的固定液么？需要做冰切，HE染色。目前是直接放在4%PFA里。有什么固定液配方吗？

dxy_gwrp7ndq

4％多聚甲醛（ PFA ）的配制方法：1L: PFA 40g0.1M PB ( pH 7.4）先加入500∽800ml，加热至60℃，磁力搅拌使粉末完全溶解，再稀释至1L.* IL 0. 1M PB ( pH 7.4)： A : NaH2PO4 .2H2O 2.96362g B : Na2HPO4 .12H2O 28.99476g或Na2HPO4 11

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问免疫荧光实验目标蛋白的荧光很弱，导致组间差异并不明显，造成假阴性结果是什么原因？

府宅

通过文献等查找一下目标蛋白在该组织或细胞的表达丰度如何。若该蛋白本身表达就很少。如果抗体修复不充分，抗原表位未完全暴露，也会出现弱标记现象。比如，尽管大多数抗体都是在酸性环境中修复，但是也存在少量的抗体需要在碱性环境中修复，建议查看抗体说明书，严格按照其修复条件进行实验。

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问DNA提取的要求是什么？总是实验失败，大家告诉一下

whilt-shirt

主要是无菌操作，尽量选用进口的试剂盒

4 回答571 围观

问如何减少微生物实验操作的霉菌污染？

师医生说

有霉菌生长就会导致微生物生长的失败。首先保证实验室温，湿度。最好设置温控系统进行监控。同时高压灭菌后保持容器干燥。在生物安全柜内熟练进行操作。在操作前，要对生物安全柜进行至少40分钟的紫外线消毒和压力正常的条件下进行。

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问免疫荧光我想染3种蛋白我有红兔和绿鼠还应该买什么的抗体

dxy_lkpxue5w

看你一抗用的什么种属的抗体，如果你3种同时染的话，可以买个除兔、鼠来源的一抗，然后买个抗这个种属，其他荧光通道的二抗，也可以是这个蛋白的其他荧光颜色的直标一抗，但是染的时候这个直标一抗最好最后染，因为一抗来源如果跟前2个抗体一样的话，容易造成假阳性；如果两个一起或分开染色，只要一抗来源是不一样，用的二抗颜色不一样就好了

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问细胞培养需要注意什么？

迟C迟

首先注意观察细胞培养液的颜色。现在的细胞培养液通常都放有酸碱指示剂（绝大部分是酚红）。细胞在培养生长过程中，不断在培养液上清中累积酸性物质，时间长了，培养液变为黄色（同时培养液中营养物质耗尽）。其次镜下观察细胞的生长状态是否良好，是否需要传代。如果生长状态不好，需要对培养液进行调整（一般是加大血清浓度）。过于密集出现大片融合或太密集而导致细胞脱落，则进行传代。如果长势良好，且细胞培

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问免疫荧光染色实验中染料的选择。

做药鹏

尽量选择光谱重叠比较少的荧光基团进行组合，进行两个不同蛋白的共染色。标记好荧光的细胞片应今早观察，或者用封片剂封片后在4℃或者-20℃避光保存，以免因标记蛋白解离或荧光减弱，还可以利用免疫荧光专用细胞处理试剂进行预处理减少自发荧光或荧光信号的淬灭。

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问实验设备仪器，及其起步

迟C迟

提前准备细胞样品试剂：多聚甲醛 70%甲醇丙酮 PBS Triton BSA DAPI染液 DABCO Tris 甘油仪器耗材：离心机细胞培养箱培养板最重要的荧光显微镜另外给你实验步骤：细胞爬片免疫荧光实验步骤第一天：1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min；2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min， PBS浸洗玻片3次，每次3min；3. 0.5%Triton

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问为什么HEK293T细胞在玻片上状态很差？

whilt-shirt

293细胞的贴壁性比较差，有可能是细胞老化，也有可能是培养基原因

3 回答1592 围观

问如何才能提高上机细胞的活率

府宅

磁珠分选效率会低一点，但细胞活性高。FACS分选的话要加双抗，注意无菌，分选的液体里面可以加血清湿润管子。

3 回答400 围观

问酶放大免疫实验技术中，请问放大指的是放大什么呢??? 是指显色，而使得实验结果便于观察吗？但是那荧光标记技术也可以叫做放大技术吗

迟C迟

在酶扩大免疫测定技术中，半抗原与酶结合成酶标半抗原，保留半抗原和酶的生物活性，当酶标半抗原与抗体结合后，半抗原分子上的酶蛋白与抗体密切接触，使酶的活性中心受到影响，酶的活性受到抑制。测定时标本中的半抗原、酶标半抗原与抗体竞争性结合，标本中的半抗原含量越高，加底物后其OD值越高。所以放大的是荧光信号。荧光标记技术并没有放大信号，所以不能叫放大技术。

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