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问
细胞冻存使用培养液可不可以
Guoood
用10%DMSO的全培冻存细胞就可以了,如果细胞比较珍贵也可以用纯血清冻存,而且还可以考虑用商品化的冻存液也有不错的效果。全程保持无菌操作,不需要加抗生素。
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问
细胞冻存放置于负80度冰箱一般能够保存多久?
未来9
肿瘤细胞一般在添加冻存液保存的情况下可以在-80度保存3个月内存活率一般可在80%以上,6个月以上大部分肿瘤细胞的存活率就会降低很快,即使复苏出来细胞是活着的,但是活性也会很低,对细胞状态影响很大。如果需要长期保存,最好是储存于液氮中,
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问
请问原代小胶质细胞的提取是只能从乳鼠的大脑提取嘛?成年鼠的大脑可以吗,还是成年鼠的脊髓?
Eason老歌迷
一般是从乳鼠的大脑皮层提取。当然可以从成年鼠的大脑中提取,你一查文献就能看到,介绍了很多种方法,比如说Calvo, Belen在IBRO Rep 2020 Jun对解离方法和基于Percoll的分离进行比较过分析。
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问
细胞培养碰上支原体污染该怎么办
此用户已注销
支原体污染细胞后,有必要清除支原体,常用方法有:1)对于非重要的细胞,如培养中的细胞、WCB的细胞等,将培养物与用过的培养基灭活后丢弃即可。对于较为重要的细胞,如来源珍贵或实验室中细胞保藏量较小等可以采用以下(2)-(8)的方法。2)用MRA处理:用支原体清除剂处理细胞,作用浓度为 25μg/ml,两周可以清除支原体。3)用清洗纯化法清除支原体污染的方法:细胞营养驯化→优质细胞群的筛选→细胞清
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问
猪肺原代巨噬细胞适合什么培养基,1640还是高糖
bamboopiggy
巨噬细胞一般算悬浮细胞,适合用1640养
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问
细胞增殖检测方法的选择?
一个小哭包
总结来说,MTT法和CCk-8法适用于所有细胞。但如果对细胞增殖或细胞毒性的检测要求不是很高,从经济角度可以选择MTT法。如果对细胞增殖或细胞毒性的检测要求灵敏度非常高,并且希望非常便捷,在研究经费许可的条件下,建议选择使用CCK-8法。
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问
DMSO对冻存细胞复苏的影响?
whilt-shirt
需要立即去除DMSO,低温时DMSO对细胞有保护作用,常温下DMSO对细胞就有毒性了
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问
关于肿瘤细胞悬浮培养?
一个小哭包
主要是,正常细胞和癌细胞相比有接触抑制现象,使其只能贴壁生长;而且癌细胞的质膜结构发生了变化,间隙连接减少或者消失,细胞通讯受阻,发生成摞的生长
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问
lo2可以用高糖dmem培养吗?用1640长得太慢了感觉?
Xiong205
按照官方推荐培养基比较好,我做lo2不算慢,如果已经是太慢的程度,考虑是否是支原体污染,支原体污染的重要特征之一就是细胞生长速度明显变慢。可以检测一下培养液是否有支原体,如果有用biomy3清除14天左右。细胞状态会变好。
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问
有人用trizol同时提取rna和蛋白过吗?按网上的步骤提取的蛋白质是不是很很难溶解?
天一湖医者
具体的提取步骤如下:1.样品加氯仿分层后,移去上层水相(该水相里就是RNA,可照常继续进行RNA的提取),加0.3ml乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA,涡旋混合,室温放置3分钟,2-8℃不超过2000×g离心5分钟。【注:这一步同时可以除去未完全消化的残渣】2.小心吸出沉淀后的上清,加1.5ml异丙醇沉淀蛋白质。室温放置10分钟,2-8℃12000×g离心10分钟弃上清。3.加2ml含0.3M盐酸
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问
为什么用LPS诱导不出BV2细胞的炎症?
Eason老歌迷
应该是你的lps问题。LPS它的说明书上写的是:”在缓冲液或培养基中浓度为1 mg / ml的溶液在2-8°C的温度下稳定大约一个月。冷冻的最多可保存2年。 不建议重复冷融。 溶液应储存在硅烷化的容器中,LPS可以与塑料和某些类型的玻璃(特别是浓度<0.1 mg / ml)结合。 如果LPS浓度> 1 mg / ml,则对小瓶侧面的吸附可以忽略不计。“
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问
怎样提高原代乳小鼠心肌细胞的得率?得到更多跳动的心肌细胞?
此用户已注销
用多聚赖氨酸预包被处理培养皿,采用两步法(0.25%胰酶4℃过夜,0.5 mg/m L-1.0 mg/m L II型胶原酶+5 mg/m L白蛋白的胶原消化液37℃短时多次消化),通过差速贴壁70 min+5-溴脱氧尿嘧啶的使用来纯化心肌细胞.倒置相差显微镜下观察心肌细胞形态变化,台盼蓝染色法检测细胞存活率,α-actinin特异性免疫荧光染色鉴定心肌细胞并计算纯度.结果心肌细胞形态良好,自发搏动
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问
乳腺癌细胞中有一些小黑点,是黑胶虫吗?应该怎么办?
Summeryi
正常情况下,细胞也会产生一些小碎片呈现为黑色。还是要观察黑色的点点是否在运动,并且注意细胞的状态
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问
如何给文献作者发邮件借文献中用的细胞系?
Eason老歌迷
如果是国外的,还得是自己学着做。如果是国内的可以试着找联系方式,发邮件问一下。
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问
原代猪肺巨噬细胞最长可以培养多长时间,有传代的可能吗
Eason老歌迷
一般都是原代培养。如果养的好,可以存活差不多两到三周吧。
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问
关于瞬转,目前质粒已经构建好,但是使用转染试剂性价比不高,请问有推荐的吗?
Omiget12
建议可以用慢病毒包装,我们经常做还是可以的。转染向Lipo这些价格太高了,没有必要,可以用些性价比比较高的就行。可以查一下Omifection这款产品。
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问
细胞冻存推荐密度是多少?如何配置所需冻存液
Eason老歌迷
冻存液的大致的配置方法:冻存液=10% DMSO + 90% FBS。但是呢,这个比例,各个实验室都是不一样的,因人而异吧推荐细胞数100-300万/ml
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问
MTT的OD值有的说要在0.1-0.7,有的说要在0.8-1.2之间,到底要在什么范围呀,求指导!
bamboopiggy
这个只要能说明你实验的问题,没有必要太纠结,差不多0.5-1.0就可以
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问
细胞没有污染,但经常有漂浮的细胞的原因
番茄炒蛋不加番哈哈
会不会是细胞的状态不好呢?如果是需要基质胶的,也可能基质胶不行吧,我不专门养细胞,有限的认知只能到这一步啦!
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问
细胞培养出现蜂窝状是什么原因
Eason老歌迷
是不是细胞老化呢?如果出现细胞老化,就会有增殖减弱,贴壁能力减弱 你可以用细胞衰老检测试剂盒染色,来判断一下
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