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科研学霸天团,48小时有问必答
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细胞有时候长了四天了还没长满的原因是什么
bamboopiggy
看你初始铺板的密度,还有你细胞的状况。这个不能看长几天。
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问
由一个单克隆细胞分裂来的CHO细胞,为什么有的大小不一?如何控制细胞粒径,避免其过大?
dxy_3xid5eh3
单克隆细胞也会随着培养时间的增长确实是会产生一些变化,也会存在细胞个体之间的差异,只是相对pull的细胞来说差异更小。可以通过流式分选的方法进行一定粒径的分选。
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问
贴壁细胞传代时候怎么控制胰酶的量呢
Keven轩
一般贴壁能力正常的细胞低浓度胰酶用1mL即可,若贴壁能力强可以增大胰酶浓度或用量
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问
Walker 256细胞可以连续传代多少次之后冻存
天一湖医者
原代分离的细胞最好在3代以内,如果是无限传代细胞无所谓。
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问
想问下中间细胞聚团的原因是什么
dxy_90k7dzq
状态不好、老化的细胞,也可能会出现抱团生长的情况(比如换液不及时、长的太满才传代、污染等造成的细胞状态差)。
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问
贴壁细胞培养应几次换一次培养基?
Keven轩
如果是293T等增殖速度较快的细胞就不需要换了,直接传代即可。如果增殖速度慢,那么一般一天一换液
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问
细胞总是爱叠着长,之前不是这样的,请问是什么原因
bamboopiggy
这个感觉是你胰酶消化没有消化成单细胞,所以才逐渐扎堆生长
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问
细胞无明显污染但是总是飘很多
dxy_ybjer4q9
是不是培养基添加fbs和双抗的量不足导致的我们一般是培养基:fbs:双抗=50:5:1
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问
条件培养基的离心纯化问题
Eason老歌迷
s2结束后,收集培养基上清液,并离心,过滤,即可得到条件培养基
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问
鼠的nk细胞分离鉴定
Miracle星
小鼠外周血nk细胞分离液试剂盒,全血或者组织原浆都可以用。
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问
结直肠癌元代细胞培养
Eason老歌迷
一,操作前就应该提前准备好所有实验所需物品,以减少走动,二,操作时,试剂用完之后,及时盖上盖子,移动的时候尽量不要从开口容器上经过。三,冻存细胞时冻存管盖子需拧紧。等反正无菌操作的原则有很多,我只是提了实验中的我经常疏忽的小点。
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问
T3代细胞传代,生长9天细胞突然变黄,显微镜下镜检全都是死细胞,为什么细胞突然死亡?
bamboopiggy
考虑细胞数目是否太多?养的时间太长,导致细胞太拥挤,然后变黄一般就是细胞多了。在除外细胞污染的情况下。
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问
组织细胞取材后如何稳定
dxy_bz3louvw
应该提前准备好无血清培养基,待组织离体后直接放入培养基,减少等待时间,在培养皿中进一步分离纯化(弃掉多余组织),然后再进行后续操作。
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问
P62跑出来条带淡背景很脏怎么办,我用的是abcam的一抗,1:10000。大佬救救孩子吧
Eason老歌迷
背景脏不一定是因为仪器不干净造成的,也有可能是蛋白降解或者整个实验过程中条件不合适造成的。
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问
关于组织消化后有组织块的问题
天一湖医者
因为胰酶消化时间太长细胞破碎掉了。可以试试不用胰酶,只用胶原酶,减少组织用量。
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问
组织细胞消化液的注意事项
天一湖医者
消化酶在-20度下,放一个星期左右是没什么问题的,时间再长了不太好。
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问
细胞降脂模型不好建立,诱导分化不了成熟脂肪细胞,脂滴较小是什么原因
Eason老歌迷
诱导剂一定要选好,不能用甲醇固定,因为甲醇为脂溶剂,可以用4%多聚甲醛水溶液固定既可。而且吧染色之后不能脱水,甘油明胶封片。
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问
可否使用与原先不同的培养基?
以水为师ISD8
可以的,但是不能一下子更换条件。要循循渐进,比如将两种培养基混合,不断换液,不断加大新换培养基的比例,就能更换称新培养条件。
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问
有小鼠肝kuffer细胞分离的详细步骤么?之前按照一篇硕士毕业论文的操作,一只老鼠只能分300w左右
dxy_y6ygzew3
请问博主 优化后的具体步骤油吗?能取到多少细胞呢?
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问
细胞出现杆状污染,部分杆状聚集成团,这是啥原因导致的?
Guoood
细胞出现细菌污染,镜下可见杆状细菌在游动,如果不会游动而且培养基清亮则不是污染。杆状成团是因为细胞太密,铺细胞时没有吹打散。
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