实验问答22,786,983 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

细胞

问原代树突状细胞7天后收集悬浮细胞重新种板后还需要再加细胞因子嘛

Eason老歌迷

肯定需要的，你都重新种板了，你要不加细胞因子，肯定不行。

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问甲状腺癌细胞不明原因干瘪死亡

Eason老歌迷

感觉是你的培养基不适合,或者是缺少了某个东西，ph值不对?

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问细胞铺板周围密，中间稀问题

Eason老歌迷

我之前刚开始也会有周围密集中间稀的情况，我是用下面办法改善的，不知道对你有没有用。一般 96 孔板我每孔是加 100 微升细胞悬液，从孔的左边靠近底部加入。加完半边板后，将未加的细胞悬液混一下，再继续加剩余的半边板子。都加完后盖上盖子，左手轻轻扶住板的左边，右手轻轻敲击板的右边缘。注意把握力度（我一般轻巧敲三下），太强或次数太多会导致细胞集中成堆，将板顺时针旋转（逆时针效果不好），依次敲击剩余三个

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问细胞共培养

Eason老歌迷

关于培养基问题需要看下 A B 细胞平时里用的什么培养基了能统一最好统一吧不一样的话可以接种前换成一样的也行。做共培养，两种培养基最好一致，最差也要找个折中方案，或者控制培养时间，使不同的培养基不至于产生额外影响；另外，你想看A对B的影响，把B放在上室，收集起来很麻烦，面积也不够大；不知道你看到过共培养小室没有，再好的小室也不是全透明的，放在上室的细胞观察和照相都不如下室。理论上上下室细胞

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问这是不是脂肪细胞呢？！

Eason老歌迷

可能是，一般是80%的牛前体脂肪细胞接种后12h开始贴壁,4d后开始向脂肪细胞转化,10d后绝大部分细胞脂滴融合,细胞脂肪含量增加;分离的牛前体脂肪细胞接种后1~2d生长缓慢,3~8d进入对数生长期,9d后进入平台期,之后细胞数目开始下降。经胰岛素诱导分化过程中,会生长的很快

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问请教下H9C2细胞培养相关问题

Eason老歌迷

你要是ct值这么大，肯定有问题。可能是模板量低或基因表达丰度低，建议增加模板量观察Ct值能否成相应倍数减少。或者qPCR整个反应条件不适宜或引物设计不当导致扩增效率低，建议通过标准曲线确认扩增效率。或者扩增产物过长，建议用三步法程序扩增或优化引物，扩增产物长度最好不超过300bp。或者体系中可能存在抑制剂影响酶的活性，建议梯度稀释模板或重新制备纯度更高的模板。你可以和你的同期讨论讨论。

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问求应用荧光分光光度计检测细胞内ph的方法

天一湖医者

近中性pH的检测BCECF及其膜渗透性AM酯是用于测量细胞内pH的最广泛使用的荧光pH指示剂。它的pKa约为6.98，非常适合测量各种细胞类型的胞质中的pH变化，以及监测近中性环境中的pH变化。BCECF在〜504 nm处有一个最大吸收，在〜440 nm处有一个等吸收点，在〜527 nm处有最大发射。尽管BCECF具有双重激发的比值特性，但一些特性使比值成像不理想。其等吸收点与最大激发之间距离较大

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问求助！提取原代鸡肠上皮细胞

dxy_ebp9jp34

你好，请问找到减少成纤维细胞的办法了嘛？

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问中性粒细胞体外培养聚团

Eason老歌迷

可能有几个原因，一个是细胞离心速度过大或时间太长。或者是你消化不完全的时候，细胞和细胞之间的连接没有分开；消化过度的时候，圆形的细胞容易聚堆，再分开很困难。可能是状态不好、老化的细胞。或者是传代时没有吹打均匀，细胞团多。

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问抑菌率实验求助

Eason老歌迷

一般不用。早期的血清制备中的滤膜的孔径大于0.22um，不能有效的去除支原体的污染。热灭活可以去除支原体的污染。但是现在血清制备中的终端滤膜的孔径为0.1um甚至小到0.04um，所以血清中一般没有支原体的污染。

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问斑马鱼茜素红染色求助

Eason老歌迷

这种情况一般因为组织固定时采用了酸性甲醛;或者组织在甲醛中浸泡时间太长;或者久置的甲醛变性分解为甲酸。要么使用新鲜的中性甲醛固定，要么在存放的甲醛中加一点碳酸钠中和甲酸。对于已经固定的组织可考虑再次固定；对于已经制出的片子，染色前采用5%重铬酸钾溶液浸泡半小时以上，然后自来水漂洗5min，可改善染色

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问时间分辨荧光层析试纸CV值如何控制

精准检验每一天

可以从两方面解决问题，一是微球构建是否均匀，二是微球所处的环境是不是稳定。这两个解决了就应该没有问题了！

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问求助：这是金黄色葡萄球菌吗？

Eason老歌迷

显微镜下观察该菌为革兰氏阳性球菌，排列成葡萄串状，也有个别2个或3个球菌相连。根据菌落形态、镜检结果怀疑该菌为葡萄球菌。

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问求助，请问这个是噬菌斑吗

Eason老歌迷

不太像是噬菌斑。噬菌斑的描述，当寄主细胞被噬菌体感染后细胞裂解，在菌苔上出现的一些无色透明空斑（负菌落）。你这个更像是接种时尖锐物品误触导致的。

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问共聚焦免疫荧光分析

balalaLy

一种是可以取多个视野计算荧光强度然后取平均值，一种方法是计算阳性染色的细胞数

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问请问这个细胞是被真菌污染了吗

balalaLy

应该是污染了，但不大确定是哪种菌，扔掉重新复苏吧

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问如何用七氟烷处理细胞？

bamboopiggy

你这个可能要用到七氟烷挥发罐，用特殊的chamber将细胞养在里面。

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问seer数据库

Eason老歌迷

打开seer数据库，在SEER点击Selection, 选择Edit按钮，根据你自己的需要挑选患者资料，比如说我选择年龄为0-14岁、第一次诊断恶性肿瘤的，诊断时间为20071.1-2015.12.31，见下图。你可以选择做没做过肠镜检查的。

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问求助：SY5Y细胞培养问题

Eason老歌迷

用显微镜观察，看看游动不游动。不游动，它可能是细胞碎片，如果是游动的，就说明有细胞污染。我感觉你这个是传代时机不对，细胞老化，产生的碎片。

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问关于细胞复苏传代的问题

Eason老歌迷

细胞密集的地方，新生细胞没有办法找到贴壁点，细胞当然会飘起来。同时一些老化了的细胞贴壁能力有所下降，容易被竞争去贴壁的行列，从而飘起来。所以建议你传代的时候把细胞吹散均匀，不要有抱团的。另外就是及时传代，并不是细胞长满才传代，当有个别地方长的过于密集，容易叠加的时候应该就要传代了。

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