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科研学霸天团，48小时有问必答

细胞

问这是不是脂肪细胞呢？！

Eason老歌迷

可能是，一般是80%的牛前体脂肪细胞接种后12h开始贴壁,4d后开始向脂肪细胞转化,10d后绝大部分细胞脂滴融合,细胞脂肪含量增加;分离的牛前体脂肪细胞接种后1~2d生长缓慢,3~8d进入对数生长期,9d后进入平台期,之后细胞数目开始下降。经胰岛素诱导分化过程中,会生长的很快

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问请教下H9C2细胞培养相关问题

Eason老歌迷

你要是ct值这么大，肯定有问题。可能是模板量低或基因表达丰度低，建议增加模板量观察Ct值能否成相应倍数减少。或者qPCR整个反应条件不适宜或引物设计不当导致扩增效率低，建议通过标准曲线确认扩增效率。或者扩增产物过长，建议用三步法程序扩增或优化引物，扩增产物长度最好不超过300bp。或者体系中可能存在抑制剂影响酶的活性，建议梯度稀释模板或重新制备纯度更高的模板。你可以和你的同期讨论讨论。

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问求应用荧光分光光度计检测细胞内ph的方法

天一湖医者

近中性pH的检测BCECF及其膜渗透性AM酯是用于测量细胞内pH的最广泛使用的荧光pH指示剂。它的pKa约为6.98，非常适合测量各种细胞类型的胞质中的pH变化，以及监测近中性环境中的pH变化。BCECF在〜504 nm处有一个最大吸收，在〜440 nm处有一个等吸收点，在〜527 nm处有最大发射。尽管BCECF具有双重激发的比值特性，但一些特性使比值成像不理想。其等吸收点与最大激发之间距离较大

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问求助！提取原代鸡肠上皮细胞

dxy_ebp9jp34

你好，请问找到减少成纤维细胞的办法了嘛？

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问中性粒细胞体外培养聚团

Eason老歌迷

可能有几个原因，一个是细胞离心速度过大或时间太长。或者是你消化不完全的时候，细胞和细胞之间的连接没有分开；消化过度的时候，圆形的细胞容易聚堆，再分开很困难。可能是状态不好、老化的细胞。或者是传代时没有吹打均匀，细胞团多。

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问抑菌率实验求助

Eason老歌迷

一般不用。早期的血清制备中的滤膜的孔径大于0.22um，不能有效的去除支原体的污染。热灭活可以去除支原体的污染。但是现在血清制备中的终端滤膜的孔径为0.1um甚至小到0.04um，所以血清中一般没有支原体的污染。

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问斑马鱼茜素红染色求助

Eason老歌迷

这种情况一般因为组织固定时采用了酸性甲醛;或者组织在甲醛中浸泡时间太长;或者久置的甲醛变性分解为甲酸。要么使用新鲜的中性甲醛固定，要么在存放的甲醛中加一点碳酸钠中和甲酸。对于已经固定的组织可考虑再次固定；对于已经制出的片子，染色前采用5%重铬酸钾溶液浸泡半小时以上，然后自来水漂洗5min，可改善染色

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问时间分辨荧光层析试纸CV值如何控制

精准检验每一天

可以从两方面解决问题，一是微球构建是否均匀，二是微球所处的环境是不是稳定。这两个解决了就应该没有问题了！

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问求助：这是金黄色葡萄球菌吗？

Eason老歌迷

显微镜下观察该菌为革兰氏阳性球菌，排列成葡萄串状，也有个别2个或3个球菌相连。根据菌落形态、镜检结果怀疑该菌为葡萄球菌。

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问求助，请问这个是噬菌斑吗

Eason老歌迷

不太像是噬菌斑。噬菌斑的描述，当寄主细胞被噬菌体感染后细胞裂解，在菌苔上出现的一些无色透明空斑（负菌落）。你这个更像是接种时尖锐物品误触导致的。

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问共聚焦免疫荧光分析

balalaLy

一种是可以取多个视野计算荧光强度然后取平均值，一种方法是计算阳性染色的细胞数

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问请问这个细胞是被真菌污染了吗

balalaLy

应该是污染了，但不大确定是哪种菌，扔掉重新复苏吧

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问如何用七氟烷处理细胞？

bamboopiggy

你这个可能要用到七氟烷挥发罐，用特殊的chamber将细胞养在里面。

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问seer数据库

Eason老歌迷

打开seer数据库，在SEER点击Selection, 选择Edit按钮，根据你自己的需要挑选患者资料，比如说我选择年龄为0-14岁、第一次诊断恶性肿瘤的，诊断时间为20071.1-2015.12.31，见下图。你可以选择做没做过肠镜检查的。

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问求助：SY5Y细胞培养问题

Eason老歌迷

用显微镜观察，看看游动不游动。不游动，它可能是细胞碎片，如果是游动的，就说明有细胞污染。我感觉你这个是传代时机不对，细胞老化，产生的碎片。

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问关于细胞复苏传代的问题

Eason老歌迷

细胞密集的地方，新生细胞没有办法找到贴壁点，细胞当然会飘起来。同时一些老化了的细胞贴壁能力有所下降，容易被竞争去贴壁的行列，从而飘起来。所以建议你传代的时候把细胞吹散均匀，不要有抱团的。另外就是及时传代，并不是细胞长满才传代，当有个别地方长的过于密集，容易叠加的时候应该就要传代了。

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问如何在linux系统中循环批量处理序列文件

Eason老歌迷

一、批量在文件某行插入内容： find -type f -name ~undefined.pcf" |xargs sed -i '/aaaa/abbb/' find -type f -name ~undefined.pcf" |xargs sed -i '/aaaa/ibbb/' 其中a表示在包含"aaaa"的行后面一行加入"bbbb";i表示在前面一行加入。二、批量替换文件内容： find -type f -n

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问MTT实验

Eason老歌迷

我也遇见过这样的情况,我在同步化24小时以后加药,分不同时间点,短时间点比如4小时,没有这样的情况,但12小时或24小时就出现变黑,有时是个别孔,有时是整个扳子,后来我缩短了同步化的时间,时间点也尽量缩短,就避免了这种现象。当时我的感觉是细胞长期处于无血清状态下已经死亡了。

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问96孔板铺板数量问题

伟点丽

细胞反复吹打对细胞活性也有一定的影响，单枪加平行孔之间会有偏差，可以用排枪加细胞悬液，保持平行孔的平行性

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问想请教一下：CCK-8需要避光的原因？

balalaLy

避免试剂中的有效成分降解，但也不需要很严格避光，只要不是灯光正对着照就行。

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