腺病毒感染细胞检不出来
小马向前冲
最近在做腺病毒相关的实验，我们用293T细胞包装AAV-CMV-目的片段重组体的病毒，并测量病毒滴度对细胞进行感染初步检测病毒质量，但是不论是感染细胞12h,24h,72g,十几天都试过了，WB检不出来病毒，不知道是哪里出问题了，不知道各位大佬有没有什么想法？
我们具体的步骤是：293T收毒之后，用碘克沙醇进行处理，然后密度梯度离心，收取分层的40%部分，进行透析，然后纯化拿到病毒，QRT检 DNA CT值能到12/13，为什么感染细胞见不到呢？
3 个回答
土井挞克树
有帮助
你可以加大收取部分40%更改为60%
huarenqiang5
有帮助
考虑问题出在包装环节上，腺病毒包装设计到好多方面。
1. 293细胞是否为低代数；
2.Pac I酶切是否完全；
3. 酶切后是否去除内毒素；
4. 助燃效率是否高；
建议你注意以上几个环节，一般可以解决。
Dr_劉医生
有帮助
试试密度梯度离心加大转速和增加时间看看，是不是分离细胞的问题。
相关产品推荐
相关问答
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
提问
扫一扫
实验小助手
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序