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        化学交联法做蛋白质寡聚化的实验有人做过吗?求指导

        相关实验:动物的早期胚胎发育及腔肠动物观察实验

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        bullydee

        求助:有人用化学交联法做过蛋白质的寡聚化吗?为什么我做出来的western条带会出现很多杂带?还有一次提取蛋白都变成絮状物了,导致提取蛋白失败。是因为PBS的ph使用了碱性ph吗?

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        4 个回答

        user-title

        小小小小小小黄

        有帮助

        老师你好,请问你做出来寡聚化检测了吗,方便分享下方法吗?

        user-title

        冷泉港蛋白

        有帮助

        出现沉淀,肯定是交联过度了。没有控制好交联的浓度,反应时间,还有得及时终止反应,你得从这几个方面优化。

        蛋白电泳后,肯定是弥散的条带。单体、二聚体、三聚体、多聚体肯定都有。

        化学交联很难拿到高纯度的特定聚体,应该从生物的角度去考虑。

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        如果你的条带有很多杂带,我感觉可能是你的抗体特异性不高。我之前做化学交联看过一篇文章挺不错,分享给你“化学交联在蛋白质结构研究中的应用”

        user-title

        你好几和户

        有帮助

        一般可以分为In vivo 和in vitro两种情况。in vivo:用Cross-linker(such as DTSSP)处理细胞一定时间,如果你的蛋白是寡聚体形式存在,它可以把你的四聚体交联在一起,那么用不含DTT的裂解液收集细胞,然后跑胶,western,你可以看到在分子量4倍的地方有条带,设好各种对照,你可以判断出那是不是你的四聚体形式。

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