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        小鼠脊髓纵切-冰冻切片

        相关实验:脊髓损伤动物模型

        user-title

        popouniq

        各位老师好!本人目前实验要进行的是:小鼠脊髓冰冻切片,沿矢状面纵切片,观察再生情况。

        前期切片厚度16-18um,但染荧光 看再生断断续续,打算切厚一些进行Z轴投影,不知道多厚合适?担心太厚了1抗二抗孵育不全。

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        3 个回答

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        建议切片厚度在15微米左右为好。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        考虑进行Z轴投影是个好主意。切片厚度的选择需要在获取足够的信息的同时确保充分染色。

        一般而言,增加切片厚度可以提高Z轴投影的质量。但同时,较厚的切片可能会对抗体的孵育和渗透性产生挑战。建议您根据您使用的抗体和实验条件进行优化,以找到适合的切片厚度。

        您可以尝试增加切片厚度至20-30微米,然后进行1抗和2抗的孵育。如果发现抗体无法完全渗透或染色效果不佳,可以尝试使用增强抗体渗透性的方法,例如使用洗涤剂(如Triton X-100)进行预处理或进行抗原解蒙步骤。

        此外,您可以进行一些试验来优化切片厚度。尝试使用不同厚度的切片进行抗体染色,然后评估染色质量和可观察的再生情况。根据这些结果,选择合适的切片厚度来进行Z轴投影和观察。


        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        13um-15um左右的厚度比较合适,不建议太厚不利于观察

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