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        荧光素钠测定血脑屏障通透性

        相关实验:荧光素酶的测定实验

        user-title

        dxy_f2fu6d15

        求助)

        在动物实验中,荧光素钠测定血脑屏障通透性具体步骤?

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        2 个回答

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        血脑屏障细胞的生长


        1. 使用12 孔板,请将细胞包被液种到孔里。


        2. 将板和每个刀片解压在生物安全柜中,并在那里执行进一步步骤。使用消毒钳抓住刀片在其宽基上移动它。


        3. 用90μL的10微克/mL胶原蛋白IV和10μg/mL纤维蛋白混合物覆盖每个刀片的多孔膜。之后放入细胞培养箱中孵育24小时,在37°C下孵化。


        4. 将 1 mL 的 1x PBS 移入每个刀片,然后用真空泵吸出溶液,用于细胞培养,将刀片洗涤两次。


        注意:若使用cell systems细胞包被液,前三的步骤为:使用移液管将包被液移入孔板里,静等2分钟后吸出,无需清洗,直接执行第四步。


        5. 通过在上部移液 0.5 mL 的预热 cell systems经典细胞培养基和下腔室的 1.5 mL 来平衡膜。在具有5%CO2大气的细胞培养箱中,在37°C下孵育30分钟


        6. 种子2 x 105人类微血管内皮细胞进入每个上腔,并在细胞培养箱中以37°C孵育12孔板。


        7. 使用真空泵从细胞培养液中吸出培养基,然后通过移液 10 mL 的 1x PBS 清洗单层,然后用真空泵对溶液进行吸气。


        8. 将5ml的培养基吸出培养瓶,用1x浓缩胰蛋白酶-EDTA完全覆盖细胞。在细胞培养箱中37°C下孵育烧瓶3-5分钟。

        注:如果细胞未分离,请轻拍培养瓶让细胞脱落。


        9. 加含有血清的培养基中和


        10. .在 210 x g下将悬浮液离心 3 分钟,用真空泵去除上清液,用移液器将细胞重新悬浮在 5 mL 的培养基。


        11. 将细胞悬浮液的10μL与10μL的0.4%台盼染色剂混合在1.5 mL微管中,使用细胞计数器。将10μL的混合物加入计数室滑块,放入细胞计数器,然后开始计数。


        12. .将计数器聚焦在单元格上,使其边缘为深蓝色和中间白色。之后,启动适当的细胞计数程序。


        13.要计算每个刀片的体积,请将每刀片获得的 2 x 10^5个单元格的细胞悬浮液的计算浓度分开。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        这个你得做wb和免疫荧光法检测通透性。

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