细菌胞外囊泡提取要超滤吗？提取多少量的培养液才够做一些基础实验，WB、PCR这些？

通常需结合差速离心+超滤浓缩以获得足够纯度与浓度，基础实验建议起始培养液至少500 mL–2 L（小规模WB、qPCR、纳米颗粒分析够用），具体体积取决于菌种产率与下游灵敏度。  你可以讲的更具体一点。

1. 细菌胞外囊泡提取建议做超滤：细菌 EV 在培养液里的浓度比哺乳动物细胞外泌体还低，先 0.22 µm 过滤去掉残菌和大碎片后，上清体积往往 50-500 mL，直接往下做超速离心耗时且回收率低。

用 100 kDa 离心超滤管（50 mL→1 mL，50× 浓缩）可先把体积缩小，再 100 000×g 超速离心，沉淀量明显多，后续 WB/NTA 更容易出信号。

2. 用量
最小起始体积：细菌分泌量与菌株、诱导条件有关，经验值如下（按常规 LB，37 ℃，OD600≈0.8，Tween-20 或缺铁诱导 2 h）：

WB（1-2 个膜蛋白 marker，如 OmpA、OmpF）：

20-30 mL 培养液 → 超滤浓缩至 0.5 mL → 超速离心 → 20-30 µL PBS 重悬 → BCA 约 20-40 µg 总蛋白，上样 5-10 µg/孔即可跑胶。

qPCR（提取 EV-RNA，测 16S 或囊泡内 RNA 片段）：

50 mL 培养液 → 浓缩后超速离心 → RNA 抽提得率 5-15 ng，做 20 µL 逆转录体系足够，qPCR 可连续测 10 个以上基因。

NTA 粒径/浓度、TEM 形态：

同上 50 mL 起始，最终 100 µL 重悬，稀释 100-1000×后检测，颗粒数 1×10^9-1×10^10 /mL，刚好在 NS300 检测线性范围。

若菌株分泌能力弱（如革兰阳性菌），或要做蛋白组/质谱，建议 200-500 mL 起步，并采用“超滤+超速离心”两步法，可把总蛋白提到 100-300 µg，足够跑 1 块 SDS-PAGE 胶做 LC-MS/MS 。

做 WB/PCR 的“入门级”实验，30-50 mL 细菌培养液 + 0.22 µm 过滤 → 100 kDa 超滤浓缩 → 100 000×g 超速离心 是最常用、最省钱、信号也够的方案；超滤不是绝对必须，但能显著提高回收率和实验成功率 。