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        悬浮细胞

        相关实验:悬浮细胞的免疫荧光标记实验

        user-title

        dxy_2iqmn5h8

        求悬浮细胞做免疫荧光详细步骤

        wx-share
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        4 个回答

        user-title

        靶点科技

        有帮助

        免疫荧光详细步骤,到处都是,都是大同小异。
        核心还在于自己多做,多练习,掌握每一步的核心原理,这样才能知其所以然的注意到细节,而不是机械的做。

        对于悬浮细胞,关键难点在于固定。可以使用靶点科技的悬浮细胞免疫荧光专用玻片。

        user-title

        z流沙z

        有帮助

        其实悬浮细胞不适宜做免疫荧光,建议诱导贴壁后再做

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        以下是悬浮细胞做免疫荧光的详细步骤:

        细胞培养:将需要检测的悬浮细胞培养在含有所需培养基的组织培养皿中,以达到一定的密度。

        细胞采集:将培养好的细胞离心,去除上清液,用PBS等缓冲液洗涤2-3次,使细胞悬浮于缓冲液中。

        细胞固定:将细胞悬液滴加到预先准备好的载玻片上,使细胞附着在载玻片上。加入4%的乙醛或其他细胞固定剂,使细胞固定。

        细胞透膜破裂:加入0.1%的Triton X-100或其他细胞透膜破裂剂,使细胞透膜破裂,释放内部蛋白。

        阻断剂处理:将载玻片放入5%的BSA等阻断剂中,阻止非特异性的结合。

        抗体孵育:加入特异性的一抗,使其与靶蛋白结合。孵育温度和时间可根据实验需要而定。

        二抗荧光标记:加入标记有荧光物质的二抗,与一抗结合,形成荧光标记的复合物。

        洗涤:用PBS等缓冲液洗涤3-4次,去除未结合的二抗。

        荧光显微镜检测:将载玻片装置到荧光显微镜上,观察荧光信号,记录荧光图像。

        注意事项:

        所有步骤都要在无菌条件下进行,避免细菌等污染。

        一抗和二抗需要进行特异性和交叉反应试验,确保检测结果的准确性。

        孵育温度和时间、荧光标记物质、荧光信号的检测条件等需要根据实验需要进行优化。

        user-title

        sswei

        有帮助

        步骤:

        1. 使用PBS清洗细胞,并将细胞重新悬浮于PBS中(2-5 百万个/ml)

        2. 把悬浮细胞专用免疫荧光玻片放置于12孔或者6孔细胞培养板孔里,直接滴加细胞于悬浮细胞专用免疫荧光玻片上(每个玻片上20-30万个细胞)

        3. 使细胞附着30分钟,有些细胞需要延长附着时间,但不要超过1小时。使用约2ml PBS冲洗掉未结合细胞(切勿直接垂直滴加PBS到玻片上细胞,可将PBS滴加于板孔里侧边,然后轻轻摇晃3-5分钟)

        4. 在显微镜下检查细胞附着情况,如果需要进一步培养,那么加入1ml培养基即可;若不培养即可直接固定,染色。

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