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        悬浮细胞测不出细胞活力

        相关实验:悬浮细胞的免疫荧光标记实验

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        江湖打怪

        Day1:从C57BL/6小鼠提骨髓原代细胞,加IMDM(10%FBS),以106个/ml的细胞密度在恒温箱培养24h。

        Day2:以不同密度在96孔板同时染毒和种板,先在EP管里染毒,再种板,培养24h

        Day3:加20ul的cck8或者WTS-1,培养箱4小时测细胞活力,奇怪的是,发现对照组和溶剂对照相比都并无明显改变

        一些结果

        图片描述

        奇怪的是,对照组都无效应,贴壁细胞能达到1点几左右

        又加大了细胞密度区间,也看了了镜下细胞密度,发现也不行

        图片描述图片描述

        继续做,终于看到一点效应了,如下图

        图片描述图片描述

        继续减点细胞密度,效应也还可以
        图片描述

        然后跟老板讨论,说对于96孔板来说,这个密度太大了,关键是之前师姐种的2万效果很明显,但我做了快2月了还是不行,同实验的一个师姐做的外周血的淋巴细胞,也是悬浮细胞,她也跟我一样的问题,很多遍都不能做出来,后面还换了LDH指标,效应也不明显,关键我们也做了台盼蓝染色,死细胞并不多。求求有没有人遇到类似的问题可以解答一下,要被这个简单的细胞活力实验整疯了。

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        2 个回答

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        bamboopiggy

        有帮助

        1.你的细胞浓度2万确实有点大,可以调整一下。

        2,你加20ul的cck,那孔板中液体的体积是多少?一般加cck8 是加体积的10%。

        3.你有没有考虑过,在加入cck8后,1,2,3,4h分别测一下读值,看有没有差异。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        看你的描述考虑还是细胞密度的问题,先用预实验摸索一个合适的密度

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