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        组织切片免疫荧光双标法染色,背景异常的问题?

        相关实验:组织切片的免疫荧光双标记实验

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        lyang556

        最近做冰冻组织切片的免疫荧光双标法染色,红色单通道光下背景很干净,但是绿色单通道光下片子背景有点乱,密密麻麻有很多绿色强光点,洗了很多次还是这样,不知道是封闭的问题还是抗体的问题?

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        3 个回答

        user-title

        dxywode

        有帮助

        1.适当延长封闭时间,每次洗涤时要充分(个人认为这点洗涤很重要,不是洗的时间足够长就可以的,比如15miundefined3次就不如5miundefined5次),尽量减少非特异性染色;2.切片尽量薄3。共聚焦拍照的话,配套软件很好,可以修得很漂亮

        user-title

        府宅

        有帮助

        坏死组织灶,组织坏死后细胞破坏、酶的释放、蛋白游离、分解,复杂的肽链残段(如Fc段)可能与一抗或/和二抗结合导致最终着色。解决办法是在选择染色切片时应避免选择坏死组织较多的切片。

        user-title

        小布丁瑶瑶

        有帮助

        一个是红色荧光,一个是绿色荧光,在绿色荧光层面上会出现比较强的背景,甚至假阳性,而红光层面上背景较少,请问怎样消除或减弱绿光的背景,双染时两种二抗的滴度较之单染需不需要修改。

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