• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        用 HeLa 做自噬, LC3ii 型的变化不怎么明显,怎样才能做出有差异的图像?

        相关实验:免疫荧光技术

        user-title

        丁香实验

        用 HeLa 做自噬的本底就非常非常地高,所以刺激后 LC3ii 型的变化不怎么明显,虽然统计学上有差异,但是怎样才能做出有差异的图像来?如果减少曝光时间或者上样量等 LC3I就出不来了,如果将就 LC3I 那么 II 肯定就非常强,怎么办?


        wx-share
        分享

        5 个回答

        user-title

        西柚味的芋圆

        有帮助
        免疫荧光染的是会同时染LC3I 和II 的,这种方法也没问题,在正常细胞和受刺激的细包中都会有LC3的光点,二者的区别是受刺激的成团块状,正常的呈散点状。。。在一些可能会影响LC3的翻译的条件下,可能受刺激的细胞表现为光点也会变多,这个好理解。。。而在自噬基础水平比较低的状态,给了刺激可能也看不出太大区别时可以考虑转染,相当于给个放大镜,放大这一过程。。。 这是我这个课题结题之后重新审视这个问题得出的答案。。。autophagy那篇文献只能说用来扫扫盲可以,但是具体问题还得具体分析,还得查自己相关的文献,那篇文献也在不停的改,连原则性的东西都改了,可以对照2008和2012这两个版本看看。。
        user-title

        CXCR3

        有帮助
        我们之前染LC3ii也出现过变化显示不明显的情况,如果有条件的话,可以尝试用流式去检测LC3ii,利用histogram的展示方法,可以显示出对照和实验的差别
        user-title

        dxy_0mxazdaw

        有帮助
        LC3-II易降解,通常会使用氯喹阻断降解;另一方面,可以配12%-15%SDS-page胶,这样跑出来的LC3两条条带分得开,并且条带明显,好看!
        user-title

        txs900416

        有帮助
        LC3-II容易被溶酶体降解,建议使用氯喹阻断降解,分析自噬的动态过程
        user-title

        颜渊溪桥

        有帮助
        首先查一下你用的抗体,我记得MBL公司的LC3非常好用,并且抗体上的不要太多正常1:1000-1:2000都可以,能反复用三次。 第二,HeLa正常培养(不饥饿)LC3-II是不强的,所以也可能是实验操作问题,收样品前6-12小时换下液会好些。 第三,实在无法解决就show两张图,短曝光与长曝光,放文章里是没有问题的。
        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序