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实验问答25,225,292 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

免疫

问某一个抗体多次调整条件还是跑不出来，除了抗体本身的问题还可能是因为什么呢？

dxy_gwrp7ndq

可能原因及解决策略：1. 上样量较少,建议上到20ul-50ul看看;2. 分离胶改为12-15%;3. 提高一抗和二抗的浓度,建议提高1倍;4. 如有可能改为ECL法显色;5. 尽量使用分子量Marker来标记目的条带的正确位置.

3 回答677 围观

问染色质免疫共沉淀共沉淀实验中，验证十分沉淀目的DNA的特异性引物应该怎么设计？qpcr结果如何计算？

txs900416

引物设计原则还是参照pcr的引物设计原则，最好设计小片段的引物可以节省pcr的难度。模板应选用基因组上该基因的全系列，pcr的产物最好一边位于内含子区一边位于外显子区。chip的qpcr内参可选用一些现成的经过验证的ChIP-qPCR Control Primer Sets ，可以作为阴性对照引物或阳性对照引物直接使用，也省去各种检验的麻烦

1 回答814 围观

问Elisa实验本底颜色太重什么原因？

wuli猫宁

1、实验过程中洗涤不充分，洗后未拍干，样品观中其他成分残留或酶标记物残留解决办法：充分洗涤，静置15秒，彻底拍干。加样和加酶的拍板的滤纸应弃去不用，不要重复使用，以免被污染。2、样品稀释液污染解决办法：弃去稀释液，重新配置。3、没有正确封闭解决办法：在样品稀释液中加入动物蛋白或延长封闭时间就知道这么多，求其他解答。

3 回答632 围观

问免疫组化怎么估计抗体的使用量？

府宅

一个组织最多50ul抗体足够了。甚至更少20-30ul也可以，而且一抗还可以回收利用。

3 回答2424 围观

问请问免疫组化加热容易脱片怎么办呀？

府宅

1.自己做明胶防脱片2.买商品硅化的片子3.有正离子片子，是最好的防脱片

2 回答449 围观

问可以通过什么方法检测抗体是否适用于染色质免疫共沉淀？

dxy_gwrp7ndq

目的蛋白抗体有效性也是染色质免疫沉淀实验的关键因素。要选择高质量,高亲和力和高效价的抗体来进行实验。先做Western Blot来检验在染色质免疫沉淀实验条件下抗体是否能够和目的蛋白的抗原决定簇结合而免疫沉淀。当抗体不能有效识别交联中的目的蛋白时，可更换其他不同靶向抗原决定簇的抗体或者降低甲醛固定交联时间。

1 回答353 围观

问ELISA实验相关问题

dxy_gwrp7ndq

一般室温24h，但4度过夜确实是最好的，另外在平皿中摇似乎比封口膜更容易掌握井获得较好的效果

3 回答423 围观

问什么是核酸适配体？SELEX技术制备核酸适配体的原理是什么？

txs900416

核酸适配体（Aptamer）是一段寡核苷酸序列（DNA或RNA）。通常是利用体外筛选技术——指数富集的配体系统进化技术（Systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX），从核酸分子文库中得到的寡核苷酸片段。SELEX技术即指数富集的配体系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands by

1 回答1004 围观

问为什么染色质免疫共沉淀的时候，抗体加多了反而免疫效率低了？

府宅

抗体过多，会使假阳性信号增多，影响免疫效率

3 回答491 围观

问wb如何才能把内参蛋白条带跑直？

dxy_gwrp7ndq

1.分离好蛋白上清，在加Loading buffer，ddH2O前药先把金属浴仪器打开，使其尽快达到预定温度。然后快速于每个蛋白样品中加入LB和水。这样可防止蛋白的继续降解。2.蛋白上样时，样品要混匀，特别是做CO-IP实验蛋白样品中含珠子的一定要充分混匀3.药物或其他外界因素：使用影响围观蛋白的药物作用细胞，如长春新碱、紫杉醇等不要用tubulin蛋白；在做缺氧相关实验时不要用GAPDH；有些药

3 回答1022 围观

问chip-seq实验相关问题

txs900416

单克隆或多克隆抗体都可用于ChIP实验。单克隆抗体只识别目的蛋白的单个表位，因此有非常高的特异性，和较低的非特异结合、较低的背景和杂带，而且生产批次稳定。但是单克隆抗体识别的表位可能位于蛋白与DNA结合位置或因联过程而被掩蔽，这种情况就导致抗体不能结合该表位导致实验失败，但这种情况通常极少出现。多克隆抗体识别多个抗原表位，可以更有效地结合目的蛋白、成功率更高；但非特异结合也增加，导致杂带更多。

1 回答371 围观

问elisa实验有哪些步骤需要特别注意的呢？

dxy_gwrp7ndq

1.要注意在包被时：①板孔的选择：ELISA级别的微孔板②抗体选择：选择支持ELISA实验的抗体，根据推荐浓度稀释或摸索最适浓度③包被缓冲液：pH9.6碳酸盐缓冲液或pH7.2磷酸盐缓冲液④包被温度：2-8 ℃过夜包被或室温（37℃）包被2h⑤包被浓度：包被浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化。一般包被浓度为10ug/ml-20ug/ml。2、注意在封闭时：①包被之后一定要立即封闭（封闭非特异性

3 回答630 围观

问请问elisa实验中37℃孵育时，是放水浴锅还是恒温箱比较合适？

txs900416

水浴锅和恒温箱的区别在于湿度不同，理论上水浴锅可以防止液体挥发，但存在的问题是水浴不容易放稳，建议将elisa酶标条放湿盒中再放恒温箱以减少挥发

2 回答3853 围观

问纳米抗体作为酶联免疫实验试剂盒的潜力？

dxy_n5bf4kz7

其实我觉得纳抗在体内和细胞内的效果要更明显，合创健康的纳抗我们买过，ICC效果确实比传统抗体要好，不过他们家现在种类太少了

4 回答356 围观

问组合应用免疫抑制剂＋人狂犬病免疫球蛋白（HRIG）能否治愈狂犬病？

dxywode

这些只是实验结果，还只是很小的研究进展，毕竟距离应用到人类临床研究，犬类的动物实验都可能与小鼠具有不同的结果。但毕竟指示了狂犬治疗的可能性，推动了一个方向的发展。

2 回答447 围观

问人体免疫球蛋白是怎么样形成过程，跟强化？

txs900416

B细胞在接受抗原刺激后迅速分化增殖，除一部分分化记忆细胞外，其余分化为浆细胞。浆细胞在内质网和多聚糖体均显著增加，大量合成Ig分子。抗体主要通过类别转化强化，可转换成稳定、半衰期长的ig

3 回答986 围观

问小鼠外周血少量免疫细胞怎么测定？

txs900416

小鼠外周血少，全取后要尽量用淋巴细胞分离液分离再做进一步检测，又损失了很多细胞，还要进行pma/ion/bfa联合刺激，细胞又会损失。建议取小鼠脾脏进行实验，可获得较多的淋巴细胞。

1 回答665 围观

问免疫组化的切片相关问题

府宅

冰冻切片相比较于石蜡切片简单易行，一般进行固定脱水后，固定于包埋剂就可以在冰冻切片机进行切片。有些新鲜标本可以直接取材后，冷冻托涂包埋剂后置于冷冻托上速冻，冻好后立即切片。冰冻切片最重要的是防止样品中冰晶的出现，一般可以通过速冻的方法使组织温度骤降，减少样品内冰晶的形成。也可以将组织置于20％～30％蔗糖溶液1～3天，利用高渗吸收组织中水分，减少组织含水量。

2 回答579 围观

问酶联免疫吸附试验相关问题

dxy_gwrp7ndq

1、要保证加液量一致我们在使用时感觉滴瓶加液不如加样器好，滴瓶不易控制加液量不准，造成显色不统一，判断错误。2、显色液量不可过多加样的工作环境不能处于阳光直射的环境下，加显色系统后要避光反应，显色液量不能过多，以免显色过强。3、试剂的影响因数：应选用有国家批准文号，质量靠得住的产品，不能图便宜，忽视质量保证。试剂应妥善保存于4℃冰箱内，在使用时先平衡至室温，不同批号的试剂组分不宜交叉使用。试剂

2 回答404 围观

问chip-seq实验相关问题

dxy_gwrp7ndq

ChIP实验中的抗体对于特异性、亲和力、效价都具有较高要求，能够成功用于WB、IHC等实验的抗体并不确保能成功运用于ChIP，因此需要选用经过ChIP验证的商品化抗体，这类抗体常会标明ChIP grade。关于单抗和多抗。单抗具有特异性优势，但风险在于其识别表位可能恰好被掩蔽（DNA或交联环节），而多抗可识别多个表位可基本避免该风险。因此单多抗各有优缺点，应重点关注该抗体是否经过ChIP验证。

2 回答318 围观

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