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实验问答23,373,145 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

免疫

问PCR是在体外提供模板，高温变性，低温退火，室温延伸后才开始进行DNA片段的扩增的嘛

秋秋欣欣

PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。

3 回答350 围观

问RNAi载体构建

Eason老歌迷

RNAi载体设计与构建中设计过程如下：有研究以pCDNA3.1(+)载体为基本骨架,在其转录单元的5’端添加了一个自剪切的HDV核酶用于切掉转录后的5’帽子和其基因编码序列的3’端添加了一个自剪切的烟草环斑病毒发夹状核酶用于将3’polyA切掉,又在发夹状核酶下游添加了一个加尾信号BGHpA(牛生长激素加尾信号)。为了更加保险的防止通读现象的发生在BGHpA加尾信号下游添加了一个自我剪切的烟草环斑

1 回答899 围观

问jurkat

毕业不头秃

一般好像就用PMA+ionomycin去活化，或者再加Brefelding A让细胞因子在胞内聚集方便检测。

2 回答563 围观

问淋巴细胞分离液为什么可以区分PBMC和血细胞？

Eason老歌迷

因为淋巴分离液密度在红细胞和单个核细胞之间啊，他们一离心，不就分三层，那不就可以区分了吗!

3 回答697 围观

问碱性磷酸酶ALP单位换算

天一湖医者

g=1000mg prot l=1000ml g/l=mgprot/ml g/l=mgprot/ml prot是protein的简写。1卡门氏单位=0.482U

2 回答12816 围观

问求助激光共聚焦定位图

balalaLy

染色的步骤中有没有破膜？如果有用tritonx-100破膜可能会造成干扰。

2 回答410 围观

问重组蛋白从细胞实验到动物实验

Eason老歌迷

如果研究对象是新化合物或者一些未知剂量的药物等，给药剂量必须在做药理之前确定。我们可以首先确定化合物的毒性，一般可以通过急性攻毒14天（毒理将在后续展开），设置药物梯度浓度，确定化合物安全的给药剂量，例如10mg/kg~100mg/kg；于是我们在该剂量范围内再设置梯度浓度，用几只动物造模确定药效以及药效剂量的关系，大概能够确定EC50（有效中等浓度）。正式实验时，以EC50为中等浓度，上下各设置

2 回答949 围观

问急求如何筛选与病毒感染相关的细胞因子风暴相关宿主蛋白，谢谢各位大佬！

Eason老歌迷

具体参看这篇文章。作者用高通量筛选鉴定SARS-CoV-2感染必须基因研究者使用人的GeCKOv2文库病毒（~0.2 MOI）感染A549ACE2细胞，嘌呤霉素药筛9天，随后0.3和0.01 MOI SARS-CoV-2分别感染巴细胞，感染24h检测核衣壳（N）蛋白表达，感染6天后存活的细胞被提取DNA用于高通量测序。用3种方法（Robust rankaggregation，RIGER weigh

1 回答409 围观

问IHC染色

balalaLy

第二个的染色太深了，可以调低一点浓度

2 回答1126 围观

问orbit image analysis

Eason老歌迷

这个软件挺简单的，就是动态观察图像分析。我记得我当时学的时候就是查的一篇文献，那篇找不到了，你可以看看这篇新的:Orbit Image Analysis: An open-source whole slide image analysis tool

1 回答743 围观

问大佬能帮我看一下，我利用紫色杆菌做群体感应抑制活性，养的紫色杆菌为什么是黑色

Eason老歌迷

这是产生紫黑色色素了吧！我感觉

1 回答275 围观

问小鼠皮肤石蜡切片制作，切片组织会碎什么原因

天一湖医者

那是因为内应力被彻底破坏导致！

2 回答494 围观

问T细胞活化

Eason老歌迷

用哪个看你个人习惯和喜好。制备PBMC，并调整细胞浓度至107/ml。在每个流式上样管中加入100 µl准备好的细胞悬液，细胞数约为1x106个。按个人要求设置空白管、对照管、补偿管和样本管。

1 回答749 围观

问求助！脑组织MDA检测经验

balalaLy

有可能是细胞破碎不好，或者组织量不够。有时候也可能大胆质疑一下试剂本身……

2 回答597 围观

问各位老师，想请教一下病理组织切片脱水与浸蜡步骤的各溶剂时间怎样安排效果会好一些

Eason老歌迷

常用的脱水剂是乙醇，因为它价格便宜，易于得到。为了避免剧烈的扩散引起的组织的强烈收缩，脱水步骤应从低到高以一定的浓度梯度来进行，一般组织从50％乙醇开始，经过75%、80%、90%、95%、100%至完全脱水。脱水时间依据组织的类型和大小而定，一般各级乙醇中放置1到2h不等，如果中间须停顿，大部分材料停留在75%乙醇中，因为低浓度乙醇易使组织变软、解体，高浓度乙醇有脆化组织作用，放置时间不能过长。

2 回答761 围观

问有大佬投过中国循证医学杂志吗

天一湖医者

中国循证医学杂志还是很严格的，一般编辑感兴趣的稿件进度还是很快的，外审催的也会比较紧。如果拖很久只能说编辑不看好……如果拖了几个月没消息可以催一下，不行就转投。

1 回答596 围观

问Rstudio进行网状meta遇到的报错

天一湖医者

摘要（网络）中出错：找不到对象“网络”，这应该是你输入时出现错误。检查重试。

1 回答505 围观

问杂志目录求助

bamboopiggy

www.spandidos-publications.com/ol/17/2 。或者你只能去图书馆拍照了

2 回答303 围观

问我怎么看不懂reviewer是要求怎么修改？

bamboopiggy

1. Comment on complications associated with therapy in the patient 评价与患者治疗相关的并发症2.Comment on Clinical remission details not available reviewer的意思好像是说临床缓解的细节你为啥没有提供，如果你已经写了，可以在回信中说明一下。3. Details of

2 回答325 围观

问求助：裸鼠长毛以及皮肤角质增厚

bamboopiggy

你买的裸鼠状态确实不好了，可能这家公司的裸鼠都这样，你最好换一家公司订。

1 回答883 围观

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