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22,010,137 科研人在看
科研学霸天团,48小时有问必答
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求助🆘 有无大神讲解一下大鼠巨噬细胞抗体抗体ED1和ED2
Eason老歌迷
你查了这四种抗体的说明书吗?看文献里它们用什么抗体比较多呢?我觉得ED1和ED2,可以用CD68,CD163代替。ED1和ED2在做大鼠三叉神经冰冻切片免疫荧光时需要破膜通透处理。ED1是表示总的巨噬细胞。ED2是表示组织驻留型巨噬细胞。
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内皮细胞Cd31免疫组化染色
Eason老歌迷
石蜡切片脱蜡至水。3%H2O2室温孵育5~10 分钟,以消除内源性过氧化物酶的活性。蒸馏水冲洗,PBS 浸泡5 分钟,(如需采用抗原修复,可在此步后进行)。5~10%正常山羊血清(PBS 稀释)封闭,室温孵育10 分钟。倾去血清,勿洗,滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液,37℃孵育1~2 小时或4℃过夜。PBS 冲洗,5 分钟×3 次。滴加适当比例稀释的生物素标记二抗(1%BSA-PBS 稀释),
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问
免疫组化结果
申东熙老伯
可以试着提高一抗浓度,加长染色时间。
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问
LTBR阻滞剂
Dr_劉医生
竞争性结合位点,一个抗原抗体结合,一个补体途径结合,应该通路,比如SSSLTBR-IgBaminercept阻断LTa1b2和LIGHT信号通路原发性干燥综合征
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问
agonistic mAb和普通单克隆抗体的区别
朱芮reda
可以混用,一个单抗,一个单抗抑制剂
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问
【求助】PBMC培养污染?
此用户已注销
培养基白色絮状物是在培养基配制完成后没有及时包扎灭菌,是微生物作用所致,也是培养基不同成分之间发生反应所致。总之,培养基配制过程中就需要打开灭菌锅了,尽快灭菌,就不会有白色絮状沉淀了。
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问
涂菌12小时后,细菌成一片,原因为何
慈悲为怀医德为镜
有可能是浓度太高了,建议稀释一下试试
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问
石蜡切片的制备过程中昆虫组织切不下来?
你好几和户
自己感觉可以检查下切片机的零件是否旋紧,切片是用力要适当,不可过猛,而且现在是夏季,石蜡容易软化,可用冰块冷却。
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问
免疫荧光实验出现杂点?
junyong151
常见的原因其他老师都提到了,还有一点就要考虑一下自己所用的洗片子的溶液是否有结晶等东西造成了这种非特异性的染色,我们可以过滤一下溶液,看看是否可以去除这些杂质。
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问
求助:免疫荧光实验出现结晶的物质?
bamboopiggy
检查一下你的盖玻片有没有特别脏,还有就是你拿什么封的片?
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问
关于大鼠软骨细胞的II型胶原免疫组织化学染色问题?
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免疫荧光染色出不来,有可能是一抗的问题。
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问
组合免疫检查点疗法可以通过增强代谢适应性来改善抗肿瘤效果吗
junyong151
通过靶向特定免疫抑制代谢物和细胞因子,可能会逆转T细胞功能抑制,增加T细胞抗肿瘤活性,最终提高免疫检查点抑制剂的疗效。
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问
在做免疫荧光实验时,怎么消除背景荧光?
风闲少年
尽可能冰冻切片吧,然后每次清洗都要有三次,做好阴性对照,只加二抗那一组。
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问
TGF-β1造内皮间质转化模型
风闲少年
目前HUVEC培养使用EGM2培养基,里面的血清可以先不加血清,使用kit中的其他因子。
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问
悬浮细胞做免疫荧光如何贴壁
Dr_劉医生
都是细节问题!1. 爬片,一定要注意密度密度!!细胞不能太多,连成一片那种细胞很容易在 PBS 漂洗步骤大片脱落。其次细胞也不能太少,这样细胞也会被洗掉,拍照效果不理想。正常的细胞密度最好在 60-70% 左右即可,在显微镜下可以看到细胞一个一个的形态。有些细胞不容易贴在玻片上,会导致细胞形态和培养瓶内不一致,可以用明胶或多聚赖氨酸预处理一下玻片,再接种细胞即可;2. 固定固定,细胞长好后一定固定
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问
免疫荧光目的蛋白不好找,找到了要么拍不出来,或者拍出来曝光时间特别长,特别糊,一直动
此用户已注销
通透剂作用的时间或强度、换用其他抗体,使用正确的抗体。
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问
免疫荧光实验爬片上的细胞每次根本都不能洗5min,特别容易掉,可能每次洗到最后,细胞都没了
Dr_劉医生
我的经验可能原因是细胞密度过高,特别是贴壁细胞,一团一团的,并不是很好的平面化,需要用枪头加细胞悬液给弄平,有个之前找的方法供参考。建议用10μl的小枪头吸取细胞悬液,在25mm的细胞爬片上从玻片外圈向内圈转圈加样,这么做相当于在缓慢加样的过程中,玻片上的细胞又完成了一次从外向内和从内向外的混匀过程,防止某一部位的细胞聚集。加样结束后,镜下观察细胞初步密度。如果细胞密度过大,可以将玻片上的细胞悬液
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问
为什么细胞免疫荧光只能看到核,胞浆或者整个细胞的形态为什么看不到?
bamboopiggy
你核是用dapi染的吧?那个好显。然后看你的目的蛋白的位置是什么,然后选的抗体要好用。
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问
NCI-H716细胞分化问题
dxy_gwrp7ndq
基质胶可以有效帮助上皮细胞等各类细胞的附着和分化
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问
我的细胞提取液有的有沉淀,有的很清亮,为什么呢?
麻黄连翘赤小豆
如果是蛋白提取液的话,有沉淀说明蛋白提取出来了,很清亮说明里面蛋白含量少,都看不见
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