免疫荧光实验出现杂点？

常见的原因其他老师都提到了，还有一点就要考虑一下自己所用的洗片子的溶液是否有结晶等东西造成了这种非特异性的染色，我们可以过滤一下溶液，看看是否可以去除这些杂质。

非特异性结合，你试试降低一下抗体的浓度。

抗体稀释后离心，然后仅用上清液作二抗，可以很大程度减少荧光杂点。

另外，如果荧光杂点不是特别多，而阳性信号很明确的话，完全可以通过后期图像处理掉。

一是确定有阳性产物，二是降低二抗浓度，三是可以增加洗片时间。可以尝试一下

建议二抗稀释后用高速离心了5min，所涉及的液体都是新鲜配制的，然后二抗洗完立马留图。

一抗染色太久，浓度有点高，导致的非特异性结合结合，建议敷完抗体多洗几次，洗久一点。

出现杂点可能是以下几个原因：1、二抗未洗净（再使用PBS多洗几次）2、孵育过程中出现了干燥现象，产生非特异性染色（注意湿盒的使用，避免干燥）3、抗原封闭不彻底（使用二抗同源血清进行封闭，延长封闭时间等）4、一抗特异性问题（换抗体，或者多抗换成单抗进行实验)

这个有可能是二抗浓度过高导致的，建议稀释二抗浓度试试