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问
来自不同处理组的蛋白,测完浓度后,我是不是要将他们的浓度变成一样,然后上样时加相同体积的量就行了,对吗
疏影
是的。另外,具体的上样量还可能需要根据内参的检测结果进行细微的调整
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问
机体产生的针对链球菌的抗体因为交叉反应攻击自身细胞,但既然自身本来就有这种抗原为什么还会产生抗体呢?
土井挞克树
“与机体某些组织抗原成分相同的外来抗原称为共同抗原。由共同抗原刺激机体产生的共同抗体,可与有关组织发生交叉免疫反应,引起免疫损伤。例如A组B型溶血性链球菌细胞壁的M蛋白与人体心肌纤维的肌膜有共同抗原,链球菌感染后,抗链球菌抗体可与心肌纤维发生交叉反应,引起损害,导致风湿性心肌炎。...”
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问
流式细胞术抗体选择?
土井挞克树
cd44现在用的蛮多的,你可以试试这个
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问
求助流式细胞术分析标本保存的问题?
elabscience
需先制成单细胞悬液,然后使用70%乙醇固定即可,可存放于4℃/-20℃,但是还是建议尽快检测,样本放置时间过长可能会导致检测时CV值过高。
4 回答
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问
流式细胞仪进行检测出来无明显分堆且很弥散是为什么?
juyue2010
在样品处理中对细胞造成损伤,细胞状态不佳,可以先固定一下,
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问
石蜡切片做的免疫荧光,用自发荧光淬灭剂能消除自发荧光吗?
土井挞克树
可以消除但效果不一定好,可以试试化学法
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问
免疫组化做片子发现染色只有一小部分,抗体都是现配稀释的,这是什么原因
申东熙老伯
可能抗体没把别的地方覆盖住,造成别的地方不能和荧光染料结合。
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问
做实验想用流式细胞术分析细胞周期及凋亡率,都需要用到RNAs酶,可以一起检测吗?
elabscience
如果仅采用PI单染法,通过观察sub G1峰来判断凋亡的话是可以同时检测的;如果是采用Annexin V法来检测凋亡,则不能和周期同时检测,因为周期需要固定细胞,而Annexin V法需要使用活细胞。
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问
有哪些因素会导致非特异着色问题?
申东熙老伯
一抗孵育过久,浓度太高,封闭时间短,干片。
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问
IHC中标记抗体的染色剂选用有哪些要点?
土井挞克树
显色检测中需要考虑的其他因素有酶和显色底物的选择。每种检测酶都有几种不同的显色剂。HRP-DAB 是最常用的显色剂组合。显色剂的一个优点是,可以将其与有机封固剂一起使用,有机封固剂的折射率往往更好,获得的图像更清晰。但是,水介质的使用速度更快,因为无需对切片进行脱水。
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问
流式细胞术样本保存问题?
dxy_c8zsbsv5
在取样后尽快染色然后固定,一般固定后避光24h内检测都没问题
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问
求助流式细胞实验一个问题?
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检测细胞表面抗原不需要裂解细胞吧。直接用抗体标记就可以了。
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问
要检测两个蛋白的表达,一抗的种属要不同,相对应的二抗是不是也要不同?
balalaLy
可以有两种组合:一种是一抗种属不同,比如,一鼠一兔,二抗就是对应山羊抗鼠和抗兔;还有一种是一抗种属相同但抗体的亚型不同,比如一抗是mouse IgG 2a和mouse IgG 1然后对应的二抗是山羊抗mouse IgG2a和 mouse IgG1.
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问
免疫组化实验 组织是小鼠 一抗用的兔来源 二抗可以用山羊抗鼠/兔吗 还是可以用针对一抗是兔来源的二抗?这俩有什么区别吗?
balalaLy
二抗要用非样品及一抗来源的抗一抗种属的。所以你一抗要用非小鼠来源的,如兔来源,二抗要用非鼠,非兔来源的抗一抗的,即羊抗兔,或者驴抗兔。如果二抗用鼠来源的,就跟样品的小鼠同种属,会因为内源性IgG的问题造成非特异性结合特别多,干扰目的蛋白的结合。理论上是这样的。
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问
流式细胞仪需要用每次跑样品老实堵
juyue2010
有大的颗粒,上流式时先用细胞筛处理一下。
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问
流式点图分群不明显是否有相应的补偿方法来进行调整?
土井挞克树
可以调节补偿,把强荧光和弱荧光区分。
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问
流式细胞术中的死细胞怎么去除
土井挞克树
低浓度的DAPI溶液可去除流式细胞术中的死细胞
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问
用同一种细胞提取蛋白,变性后跑wb ,同样上样量同时制胶同时跑胶,最后显影的时候同一个抗体比如内参条带不齐的原因
balalaLy
上样误差或者定量问题,蛋白定量只是相对准确的,最终以结果为准。根据第一次的条带可以做适当的上样量的调整。
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问
如何提高DNA浓度?
土井挞克树
浓度不够的时候可以加引物,或者聚合酶链式反应
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问
用组织的石蜡切片做免疫荧光时有很强的非特异性染色,并且目的蛋白的荧光表达有点弱的原因?ps: 用细胞做免疫荧光时染色很强
balalaLy
抗原修复的条件需要再优化一下。比如抗原修复液的选择、时间
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