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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
一般一次上样的蛋白总量是多少,跟目的蛋白的表达量有关系吗?
balalaLy
跟目的蛋白的表达量有关系,目的蛋白表达低,总的蛋白上样量得加大
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问
二抗是生物素化的抗体,三抗是亲和素生物素体系,不知采用这样的方案后,封闭液是否要作调整,能否再用5%的脱脂奶粉呢?
是虈亣靌
不能使用脱脂奶粉,用BSA(5%)代替会好一点。
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问
我所测定的蛋白分子量是100KD左右,按理说分离胶应当采用7.5%,但资料却要求分离胶和浓缩胶均采用11%的配方,不知为何?
土井挞克树
具体可以参考下面的制胶浓度表格。你这个还是适合11%的胶,7.5%也可以跑,不过容易曲线有偏移。
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问
蛋白变性后可以存放多久?
huarenqiang5
-80℃,若没有反复取出冻融,保存一两年没有问题。
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问
裸鼠的免疫功能不全临床表现是什么
彭文彬
雌性裸鼠生育能力极其低下。胸腺發育不良
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问
如果上样量超载,要用什么方法来增加上样量?
balalaLy
换厚的10孔梳子,孔径比较大,可以加到50ul左右
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问
分离的蛋白是分子量200kd的,SDS-PAGE电泳的分离胶浓度多大合适?积层胶的浓度又该用多少?这么大分子量的蛋白容易作WB吗
paj12345
200KD,分离胶浓度8%比较合适,适当延长电泳时间,浓缩胶5%,只要操作得当,WB应该能跑出来。以下是本实验室的配胶成份表:
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问
如果目标蛋白是膜蛋白或是胞浆蛋白,操作需要注意什么?
NatureBios
提蛋白根据蛋白表达位置可以选择对应的裂解液,如提胞浆蛋白的裂解液,提膜蛋白裂解或全细胞裂解液,操作上常规的注意事项那就是冰浴裂解,蛋白酶抑制剂,PMSF(磷酸化蛋白检测时磷酸酶抑制剂cocktail)等
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问
同一蛋白样品能同时进行两种因子的WB检测吗?
juyue2010
可以,在孵育1抗时剪膜,不过要注意两个蛋白要分子量不能接近
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问
同一样品能同时提RNA又提蛋白么?这样对WB有无影响?
土井挞克树
能,完全没有问题;这是两个不同的实验
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问
细胞水平要做WB,多少细胞提的蛋白够做WB?
balalaLy
一般用六孔板,每孔加100-200ul裂解液,上样15ul左右。
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问
请问DAB好还是ECM好?
汤姆卜丽波
如果你的实验条件可以的话,那首选ECM,正常实验来看,灵敏度是够的
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问
做WB时我的目的带很弱,怎么加强?
NatureBios
只要有目的蛋白印迹,后面的都很好办,我们可以在上样量,一二抗的浓度,显影液灵敏度,曝光时间等几个方面着手
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问
做WB有什么方法可以提高上样量?
NatureBios
给样本浓缩,可以用IP富集一下目的蛋白,低电压,让点样孔里面的样本往下跑一跑,再加一些样本等
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问
大分子量蛋白200KD或以上,在做WB要注意什么呢?
balalaLy
用浓度低的胶,比如7-8%的分离胶,然后转膜条件250mA 3小时左右
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问
抗原检测出的分子量比资料上的大,是怎么回事?
NatureBios
查看文献和数据库,目的蛋白是否有翻译后修饰现象,是否形成多聚体,有些化学键是否打开等因素
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问
为什么我的细胞提取液中没有目标蛋白?
申东熙老伯
是通过western检测到没有目标蛋白吗?可能是表达量低没检测到
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问
我的细胞提取液有的有沉淀,有的很清亮,为什么呢?
此用户已注销
a) 有沉淀可能因为你的蛋白没有变性完全,可以适当提高SDS 浓度,同时将样品煮沸时间延长;b) 也不排除你的抗原浓度过高,这时再加入适量上样缓冲液即可
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问
流式细胞仪上的FL2-W FL2-A FL2-H 分别是做什么的?
elabscience
理想状态下,细胞是一个一个通过流式细胞仪激光照射区的。细胞通过激光照射区所产生的荧光信号被PMT接收,转化成电脉冲信号,如图所示:从细胞进入激光照射区到离开,电脉冲信号由0到达峰值,再降回0,被记录为一个峰值。H是脉冲高度,代表脉冲信号的峰值,W是脉冲宽度,是指细胞通过激光照射区域的时间,A是脉冲信号的面积。
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问
国产全自动荧光免疫测试仪稳定性如果?
NatureBios
市售的仪器,不同品牌的可能会有差别,稳定性应该都还是可以用的,我们国内各领域也都发展的很快的,
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