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科研学霸天团，48小时有问必答

问检测疫苗免疫效果时，有淋巴细胞分型实验，这个一定要用流式检测吗，看到网上有elisa试剂盒，可以选择吗？

huarenqiang5

检测疫苗免疫效果时，淋巴细胞分型实验，可以用elisa试剂盒。

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问检测疫苗的免疫效果一般选择哪些指标？

土井挞克树

可以检测抗体产生速率及有效期。

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问免疫印迹实验所有条带连成片

dxy_5kz0zll2

原因最可能是样品量上的太多，其次是电泳长时间停止样品弥散。

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问FITC-CM-Dextran 怎么配

huarenqiang5

7.6gNaHCO3，1.06gNa2CO3，7.36gNaCl，加水定容至1L。将FITC溶于DMSO中，浓度为1mg/mL。每次交联使用的FITC均应新鲜配制，避光。

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问大分子量蛋白200kDa，在做western blot要注意什么

loveliufudan

在进行 Western blot 实验时，对于大分子量蛋白（如200 kDa）的检测需要特别注意以下几点：蛋白质的迁移：由于大分子量蛋白分子较大，迁移速度较慢。为了充分迁移，需要增加电泳时间、电压或使用缓冲液含有特殊的离子浓度梯度。蛋白质的转移：大分子量蛋白转移至膜上的效率可能较低，因此需要更长的转移时间和更高的电流来促进转移。膜的选择：选择适合大分子量蛋白检测的膜。例如，PVDF（聚偏氟乙烯）膜

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问大分子量蛋白转移效率低的解决方法

loveliufudan

以下是一些可以尝试的方法来提高大分子量蛋白的转移效率：增加电流：使用更高的电流可以加快蛋白质的转移速度。一般情况下，使用200 mA或更高的电流可以提高转移效率。延长转移时间：由于大分子量蛋白的迁移速度较慢，需要更长的转移时间来完成转移。一般来说，大分子量蛋白的转移时间需要至少1小时或更长时间。使用缓冲液含有特殊的离子浓度梯度：一些缓冲液（如Tris-Glycine）中含有特殊的离子浓度梯度，可以

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问条带立即出现肉眼可见的黄色，但是显影仪器上怎么也拍不出来条带

loveliufudan

如果在显影仪器上无法拍出实验显影内参条带，可能有以下几个原因：显影时间不够长：有时候，即使条带已经显现，但显影时间仍然不够长，导致显影强度不足，无法被显影仪器检测到。建议在检测之前将显影时间适当延长，以确保显影强度充足。显影条件不合适：不同的内参条带可能需要不同的显影条件（例如显影时间、底物浓度等），如果显影条件不合适，则可能无法被显影仪器检测到。建议根据实验要求，对显影条件进行优化和调整。显影仪

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问免疫荧光是不是必须要有空白对照、阴性对照和同型对照，如果少了一个是不是要再做一次啊？

土井挞克树

不可以只设一种，你提到的都需要对照，缺乏对照的话统计学上误差增加

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问免疫荧光实验中，目标蛋白荧光很弱怎么办

loveliufudan

如果在免疫荧光实验中，目标蛋白的荧光很弱，可能有以下几个原因：次生抗体或探针浓度不够：次生抗体或探针是检测目标蛋白的关键试剂，如果浓度不够，可能无法充分与目标蛋白结合，导致荧光信号很弱。建议适当调整试剂的浓度，以确保充分结合和信号强度。特异性抗体质量不佳：特异性抗体质量不佳可能导致与非目标蛋白的结合，或者结合不充分，从而导致荧光信号很弱。建议更换高质量的特异性抗体，或者优化抗体结合条件，以提高信号

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问急急急！Taqman Pcr为什么会出现这种结果？

sswei

通道数量少，基线水平高，报告难以出。

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问有淋巴细胞做抗原实验

huarenqiang5

免疫同一只小鼠建议用同一品类的血液提取的淋巴细胞。免疫小鼠1.0×10-2.5×10 个脾细胞。

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问杂交瘤细胞什么时候进行传代？

huarenqiang5

当细胞处于对数生长的中期时，可按1:3~1:10的比例传代。每3~5天传代一次。

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问激光共聚焦显微镜与荧光显微镜显示的染色结果为何不同？

huarenqiang5

1、荧光显微镜：荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。2、激光共聚焦显微镜：激光扫描共聚焦显微技术已用于细胞形态定位、立体结构重组、动态变化过程等研究，并提供定量荧光测定、定量图像分析等实用研究手段，结合其他相关生物技术，在形态学、生理学、免疫学、遗传学等分子细胞生物学领

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问想知道免疫酶染色中的 3% 过氧化氢及 2N 盐酸是否还需要用？

loveliufudan

在免疫荧光实验中，过氧化氢和盐酸通常用于免疫酶染色的显色步骤。过氧化氢用于去除样本中的内源性过氧化氢，以避免假阳性结果。2N 盐酸则用于裂解细胞膜和细胞核，以释放酶底物和染色质，并使细胞内的目标抗原易于识别。但是，在进行免疫荧光实验时，由于您使用的是二抗 FITC 标记，而不是酶标记，因此不需要使用过氧化氢和盐酸进行显色步骤。因此，您可以不使用 3% 过氧化氢和 2N 盐酸。需要注意的是，即使您不

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问非特异性免疫荧光染色

balalaLy

可以适当延长封闭时间或者提高封闭液的血清浓度

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问细胞片组织片固定的原理

天一湖医者

固定方法可以分为两类:有机溶剂和交联剂。有机溶剂如甲醇和丙酮等可去除类脂并使细胞脱水,同时将细胞结构蛋白沉淀。交联剂如多聚甲醛通常通过自由氨基酸基团形成分子间桥连,从而产生一种抗原相互连接的网络结构。交联剂比有机溶剂更易于保持细胞的结构,但因为交联阻碍抗体结合,可能会降低一些细胞组分的抗原性,因此需要增加一个通透步骤以使抗体能够进入标本。两种固定方法都可能使蛋白抗原变性,因此使用变性蛋白作为抗原生

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问免疫荧光实验通透剂的选择及原理

天一湖医者

一般用 0.1%皂角苷戒 0.02%的Triton X-100 进行通透。

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问细胞免疫荧光实验抗原占位

土井挞克树

一般不存在，抗原占位多数可以通过提高抗体的特异性来避免

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问细胞转染了带FLAG的质粒为什么看不到荧光？

天一湖医者

和你表达的蛋白有关系.如果转染后24h没有达到蛋白表达的峰值,或者呈比较低的表达量的话,做IF时可能会信号很低,有的甚至可能观察不到信号.

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问做间接法免疫荧光染色要怎么设置对照？

土井挞克树

可以用已知的组织做阳性对照。或者直接做空白对照简单一些

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