筛选shRNA跑q跑不出来怎么办
cubeamy1905
12孔板，3T3细胞，转染试剂：lipo3000，按说明书上添加量，每孔2ul lipo3000,2ul P3000， 2.5ug cDNA，转染时间24小时，trizol法提RNA，逆转录和qPCR试剂盒做别的样品没问题。qPCR结果空白组没问题，转染组包括NC组跑出来的结果要么CT值很高，要么直接跑不出来（同样品的内参也是一样）。引物没问题，溶解曲线很正常。请问这是怎么回事呢？
2 个回答
balalaLy
有帮助
有可能是shRNA不行，重新再找一条
土井挞克树
有帮助
测序是通用引物对吧？载体是切完有胶回收过么？酶切和连接体系都是实验室公用的protocol么？退火的条件可以参考一下质粒的说明书然后用pcr仪做，那个温控准确一点。si严格意义上并不能取代sh，毕竟是个瞬时的东西
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