实验求助

最常用的就是电转化，给你附上protocol供参考，但我建议你按照文献和试剂盒的细节具体操作。

实验试剂：

GM:LB+0.5M 山梨醇。ETM:0.5M山梨醇，0.5M甘露醇，10%甘油。RM：LB+0.5M山梨醇+0.38甘露醇

电转仪：Bio-Rad的gene-pulser

方法：

1）新鲜平板挑单菌落（小一点为好）接种于5mlLB培养基中，过夜培养.。

2）测量摇管内OD，控制好接种量，使接种完毕后培养基的OD在0.19-0.2之间。培养基为50mlGM。37℃，200rpm培养至OD600=1.0（大约3-4小时）左右。

3）取全部菌液冰水浴10 min，然后5000rpm，8min，4℃离心收集菌体。

4）用40ml预冷的电转缓冲液ETM洗涤菌体，5000rpm，8min，4℃离心去上清，如此漂洗3次。

5）将洗涤后的菌体重悬于等500μl的ETM中，每管分装60μl.

6）将60μl感受态细胞中加入1-6 μl质粒，冰浴孵育5min，加入预冷的电转杯（1mm）中，电击一次。电转仪设置：2.0kv（另外我还尝试过0.8kv，1.2kv）,25μF200Ω，1mm,电击1次. （持续时间4.5ms-5ms之间）

7）电击完毕立即加入1ml 复苏培养基RM，37℃，200rpm，复苏3h后，涂板。37℃，过夜培养

转化方法很多，有条件可以做电转化，成功率高

首先诱导芽孢杆菌进入可被转化的状态，再与含有重组质粒的大肠杆菌进行共培养，期间添加多粘菌素，杀死大肠杆菌，释放出质粒。共培养之后的菌株再涂布到对应抗生素平板上进行筛选，得到被转化的菌株。