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        🔥 脂质体转染

        相关实验:脂质体转染

        最新修订时间:

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        合作专家 | 张荣钊博士

        病原生物学 福建医科大学

        材料与仪器

        步骤

        (1)细胞培养:取 6 孔培养板(或用 35 mm 培养皿),向每孔中加入 2 mL 含 1~2×105 个细胞培养液,37 ℃ CO2 培养至 40%~60% 汇合时(汇合过度,转染后不利筛选细胞)。

        (2)转染液制备:在 EP 管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量)。

        A 液:用不含血清培养基稀释 1~10 μg DNA,总量 100 μL;

        B 液:用不含血清培养基稀释 3 倍体积的转染试剂,总量 100 μL,轻轻混合 A、B 液,室温中置 10~15 分钟,稍后会出现微浊现象,但并不妨碍转染(如出现沉淀可能因转染试剂或 DNA 浓度过高所致,应酌情减量)。

        (3)转染准备:用 2 mL 不含血清培养液漂洗两次,再加入 1 mL 不含血清培养液。

        (4)转染:把 A/B 复合物缓缓加入培养液中,摇匀,37 ℃ 温箱置 6~24 小时,吸除无血清转染液,换入正常培养液继续培养。

        (5)其余处理如观察、筛选、检测等与其它转染法相同。

        注意事项

        转染时切勿加血清,血清对转染效率有很大影响。

        来源:丁香实验

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