• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        求助生化大佬,GST标签目的蛋白纯化时结合不上beads怎么办呢?该如何调整实验条件?

        相关实验:免疫球蛋白纯化技术

        user-title

        豁然开朗_华

        红框中是目的条带。诱导后量并不高,上清中有,但是结合不上beads图片描述

        wx-share
        分享

        3 个回答

        user-title

        晓雨知春来

        有帮助

        可以尝试调整结合缓冲液中的盐浓度。增加盐浓度(如NaCl) 可以有助于促进GST标签与GST beads的结合。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        可以考虑以下调整实验条件的方法:

        1. pH调整:尝试调整结合缓冲液的pH值。GST beads通常在较酸性条件下具有较好的结合效果,但具体最适宜的pH值可能因实验条件而异。尝试在pH范围内进行优化,通常在pH 7.0至8.0之间。

        2. 盐浓度调整:尝试调整结合缓冲液中的盐浓度。增加盐浓度(如NaCl)可以有助于促进GST标签与GST beads的结合。尝试逐渐增加盐浓度并进行优化。

        3. 添加剂:考虑添加特定的添加剂,如BSA(牛血清白蛋白)或Tween-20等,以增加结合的效率。这些添加剂可以在结合缓冲液中提供额外的稳定性和促进结合。

        4. 结合时间和温度:尝试增加结合反应的时间或调整温度。有时候,延长结合反应的时间或在略高的温度下进行结合可以提高结合效率。

        5. 蛋白构象调整:某些目的蛋白可能在特定的构象状态下更易于与GST beads结合。通过调整实验条件,如缓冲液成分、温度和蛋白质前处理等,可以尝试调整蛋白的构象状态以提高结合效率。

        6. 考虑其他纯化方法:如果GST beads的结合问题持续存在,可以考虑其他纯化方法,如亲和层析、离子交换层析或凝胶过滤等。根据目的蛋白的性质和结合偏好,选择适合的纯化方法。


        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        提高上样量可以提高gst目标蛋白的结合率。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序