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        蛋白诱导时间如何确定?IPTG大家都用什么浓度?

        相关实验:免疫球蛋白纯化技术

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        迟C迟

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        5 个回答

        user-title

        会心UY7N

        有帮助

        我们一般用 0.5mg/ml IPTG.第一次没有做过的时候我是每隔 2h 超净台吸入 1ml 菌液,离心,加 loading 开水煮沸保存,2.4.8.10.12.16.18 的时间点,然后最后一次的全部离心,菌体保存在-80。然后将前面取得一起用 SDS-PAGE 进行凝胶电泳,考马斯亮蓝染色,自己的蛋白大概多大,根据 marker 看那个大小的地方有没有很粗的带,看哪个时间开始表达的最好,就能确定诱导时间了

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        IPTG配制成24 mg/ml100 mM

        蛋白诱导时间,你要做预实验,因为取决于你的菌,温度,还有转速。可以梯度做一下看看,一般BL21DE3,37度,12-16个小时,200-250rpm,就可以,但是有的要降低温度,和速度,延长时间。

        user-title

        dxy_gwrp7ndq

        有帮助

        诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度。

        user-title

        dxywode

        有帮助

        一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度。

        二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导。

        三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋白表达达到最高值,最后收菌后,加上以前的取得样品跑SDS-PAGE胶检验蛋白表达。

        四、如果是酶的话就可以测定酶活确定,再跑SDS-PAGE胶检验溶解蛋白和包涵体的差异。

        user-title

        bqejjh123

        有帮助

        一般用1mM IPTG进行诱导,个人认为诱导浓度影响不大,主要是温度和诱导时间

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