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        免疫球蛋白纯化技术

        实验分类:

        蛋白质实验

        最新修订时间:

        简介

        在大多数情况下,免疫血清、杂交瘤细胞培养上清以及腹水中的抗体需经纯化后再用于各种免疫学检测中去。免疫球蛋白常用的纯化方法有盐析法、凝胶过滤、离子交换层析、亲和层析以及高效液相色谱等方法。(来源:医学基础免疫学实验指导,主编金伯泉李恩善,第1 版,北京:世界图书出版社,1990)

        来源:丁香实验

        操作方法

        盐析法纯化免疫球蛋白

        1. 取正常人混合血清加等量生理盐水,于搅拌下逐滴加入与稀释血清等量的饱和硫酸铵[终浓度为50 %饱和(NH4)2SO4],4 ℃,3 小时以上,使其充分沉淀 2. 离心(3000 rpm), 20 分钟,弃上清,以生理盐水溶解沉淀至X ml。再逐滴加饱和硫酸铵X/2 ml,置4 ℃,3 小时以上[此时(NH4)2SO4的饱和度为33 %)] 3. 重复上述第二步过程多次。将末次离心

        DEAE-Sephadex A-50柱层析纯化免疫球蛋白

        1. 称DEAE-Sephadex A-50(下称A-50)5 克,悬于500 ml蒸馏水,1 小时后倾去上层细粒。按每克A-50加0.5 N NaOH 15 ml的比例,将A-50浸泡于0.5 N NaOH中,搅匀,静置30 分钟,装入布氏漏斗(垫有2 层滤纸)中抽滤,并反复用蒸馏水抽洗至PH呈中性;再以0.5 N HCl同上操作过程处理,最后以0.5 N NaOH再处理一次。处理完后,将A-5

        Sepharose CL-4B亲和柱层析纯化IgG及IgG亚类

        1. 用0.1 M PH8.0 磷酸缓冲液浸泡SPA-Sepharose CL-4B凝胶,15 min。按1 g干胶200 ml上述缓冲液充分洗涤凝胶(用玻璃漏斗过滤或置烧杯中洗涤) 2. 装柱后用0.1 M PH8.0磷酸缓冲液平衡             3. 标本可用硫酸铵粗提物,先10000 g离心除去杂质,必要时用0.22 μm滤膜过滤。上样前用1 M PH9.0 Tris

        高效液相色谱纯化小鼠腹水中单克隆抗体

        1. 腹水10000 g离心10 min,除去细胞和杂质,在4 ℃条件下逐滴加入饱和硫酸铵溶液,使终浓度为40 %饱和硫酸铵搅拌20~30 min 2. 离心,沉淀用40 %饱和硫酸铵洗涤2次后溶于PBS,对缓冲液A(PH8.5 20 mM Tris缓冲液)透析除盐4 ℃过夜 3. 用带有1000 μl样品环的高压加样活门将透析后粗提物加样于经缓冲液A液平衡的TSK DEAE SP

        单克隆抗体亲和层析柱纯化重组人α2a干扰素(rHuIFN-α2a)

        1. rHuIFN-α2a的粗提 表达rHuIFN-α2a的工程菌用盐酸胍裂解,过DEAE凝胶柱粗提,收集活性峰。 2. 亲和层析 rHuIFN-α2a粗提物用pH7.2,0.15 mol/L PBS透析过夜,上样于经pH7.2,0.15 mol/L PBS平衡的亲和层析柱,流速0.5 ml/分,然后用大量PBS流洗至流出液OD280≤0.02,再用pH2.4,0.1

        Strep 标签蛋白纯化 protocol

        Strep-tag®技术来源于德国IBA Lifesciences 公司。利用Strep-tag®技术,可纯化得到高纯度的Strep标签蛋白,杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌表达系统皆可使用。耐受不同的缓冲条件和添加剂(高盐、洗涤剂、还原剂、金属离子和螯合剂)。标签与配体间高达pM级的亲和力使得其不仅用于重组蛋白的纯化,更适用于蛋白质-蛋白质相互作用分析。

        蛋白纯化步骤样本及缓冲液体积参考表

        [图片]

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