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        Co-ip ,如何避免下拉抗体的污染

        相关实验:免疫共沉淀(Co-IP)

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        实验室小助理夏奇

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        3 个回答

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        土井挞克树

        有帮助

        可以考虑将Co-IP抗体共价偶联到磁珠或者Agarose上——这样在洗脱的时候,抗体就不会被洗到CoIP产物中去。

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        loveliufudan

        有帮助

        在 Co-IP 实验中,下拉抗体的污染会导致实验结果的偏差,因此需要采取一些措施来避免下拉抗体的污染。以下是几种可能的解决方案:

        控制抗体的浓度:下拉抗体的污染可能与抗体浓度过高有关,因此可以尝试降低抗体浓度。

        使用预先交联的蛋白 A/G 珠子:蛋白 A/G 珠子可以用于下拉特定的抗体,这种珠子通常是预先交联的,可以避免珠子的表面被抗体污染。因此,使用预先交联的蛋白 A/G 珠子也是一种避免下拉抗体污染的方法。

        在洗涤步骤中加入牛血清白蛋白:牛血清白蛋白可以用于防止下拉抗体污染,可以将其添加到洗涤缓冲液中。牛血清白蛋白具有与大多数蛋白质结合的能力,可以将其与可能污染珠子表面的蛋白质结合,防止抗体污染。

        对珠子进行交联:在 IP 实验前,可以对珠子进行交联处理,以避免珠子表面被抗体污染。珠子的交联可以使用一些交联剂,如二氧化硅、葡聚糖等。


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        赛默飞世尔科技

        有帮助

        免疫沉淀复合物是三部分组成的,Protein A(G)凝胶,抗体IgG分子,目标蛋白。SDS-PAGE后,这些成分都会一起转移到膜上。当检测抗体与捕获抗体物种来源相同的时候,二抗会识别捕获抗体的重链轻链分子,导致出现55kDa重链带,20-25kDa轻链带的干扰。避免这些杂信号的影响呢?常见的方法有捕获抗体、检测抗体采用不同来源物种,使用针对检测抗体物种的特异性二抗;如果有可能,捕获抗体采用没有恒定区的纳米抗体。

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