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        我做了几轮gst pulldown 拉不出来蛋白。可能有哪些原因呀

        相关实验:免疫共沉淀(Co-IP)

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        实验室小助理夏奇

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        3 个回答

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        土井挞克树

        有帮助

        1. 选取的细胞中互作蛋白表达量很低;

        2. 样品中含有的非特异蛋白过多

        3. 样品中没有相互作用的蛋白质;

        4.样品中蛋白质浓度过低,肉眼难以观测到差异条带;

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        GST pulldown 实验无法拉出目标蛋白可能有多种原因,以下是可能导致该现象的一些常见因素:

        GST-tag 的特异性:GST-tag 的特异性可能不同,而目标蛋白是否结合到 GST-tag 上,可能取决于 GST-tag 的特异性。因此,首先需要确定 GST-tag 是否适合用于目标蛋白的富集。

        目标蛋白的稳定性:目标蛋白的稳定性可能会受到各种因素的影响,例如pH、温度、存在的离子、蛋白酶的存在等。在进行 GST pulldown 实验时,如果目标蛋白发生降解或者失去稳定性,就可能无法与 GST-tag 结合,从而无法被富集。

        抗蛋白酶处理:在 GST pulldown 实验中,如果目标蛋白需要进行抗蛋白酶处理,可能需要对抗蛋白酶的种类、浓度和处理时间进行优化。抗蛋白酶处理过程中,如果处理时间过长或者浓度过高,就可能导致目标蛋白的降解。

        GST-beads 的质量:在 GST pulldown 实验中,GST-beads 的质量也非常重要。如果 GST-beads 的质量不好,就可能会导致 GST-tag 的活性下降,从而无法富集目标蛋白。

        user-title

        赛默飞世尔科技

        有帮助

        因为诱饵蛋白是需要加上GST标签的重组蛋白,所以是非生理状态下的验证,蛋白质的结构和形式可能与天然状态下存在一定差异,此外GSTpull down一般用于体外验证两个已知蛋白的 直接相互作用。如果相关研究的蛋白相互左右不

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