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请问跑出来IgG泳道有和IP组一样目的条带大小的条带,且不是轻链重链的大小处,是什么原因呢?背景也很干净,没有杂带

相关实验:免疫共沉淀(Co-IP)

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实验室小助理夏奇

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3 个回答

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土井挞克树

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考虑是抗体非特异结合导致的,建议更换特异度高的抗体

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loveliufudan

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如果在免疫共沉淀(Co-IP)实验中,使用的IgG抗体出现与目的蛋白一样大小的条带,可能存在以下几个原因:

免疫共沉淀实验中IgG抗体的浓度过高:如果使用的IgG抗体的浓度过高,可能会导致其在样品中非特异性地结合,从而产生与目的蛋白一样大小的条带。

共沉淀的非特异性蛋白质:在样品中可能存在一些非特异性的蛋白质,这些蛋白质可能会与IgG抗体非特异性地结合,从而产生与目的蛋白一样大小的条带。

良性异克隆:有时候,使用的IgG抗体可能会存在良性异克隆现象,即抗体可以结合到与目的蛋白无关的其他蛋白质上,从而产生与目的蛋白一样大小的条带。

为了确定IgG抗体产生与目的蛋白一样大小的条带的原因,可以进行一些控制实验,例如只进行IgG抗体的免疫共沉淀实验,或使用不同浓度的IgG抗体等。同时,建议优化实验条件,例如降低IgG抗体的浓度、增加洗涤步骤、优化缓冲液的配方等,来尽量降低非特异性结合的产生。

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赛默飞世尔科技

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通常Igg对照是不能特异性结合目标蛋白的,如果出现条带了,要考虑同型对照或者琼脂糖珠/磁珠本身对蛋白的非特异性结合

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