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        琼脂糖凝胶电泳

        相关实验:血红蛋白电泳

        user-title

        房fangfang

        新手小白,请问大家,用了3对引物,用DNA样品都没有跑出目的条带,有两对引物还跑出来了比目的片段大的较亮条带,加了4ul的Pcr扩增产物,怎么回事呀图片描述

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        4 个回答

        user-title

        橙汁儿青柠味

        有帮助

        主要是引物设计的不够特异,所以pcr出来很多非特异性的条带。可以在设计好引物后,在ncbi上面blast验证一下

        user-title

        汤姆卜丽波

        有帮助

        你这个引物特异性不行,能p出其他条带肯定是有交叉,重新设计一下

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        使用引物扩增DNA时,如果没有成功扩增出目的条带,可能存在以下几种情况:

        引物设计不合理:引物设计可能存在问题,比如引物序列不匹配、引物的长度不合适或者引物的TM值不够高等,这都可能导致扩增失败或者产生非特异性条带。建议重新设计合适的引物,优化PCR反应条件,例如适当增加引物浓度或者调整扩增温度等。

        样品质量差:样品质量差也可能导致扩增失败。例如,DNA样品可能被污染、降解或者稀释过度等,这些都可能影响扩增效率。建议您检查DNA样品的质量和浓度,并尝试优化DNA提取和纯化过程。

        PCR反应条件不合适:PCR反应条件的选择对扩增效率和特异性都有影响。例如,PCR反应体系、引物浓度、扩增温度等都需要调整到最佳条件下。建议您检查PCR反应条件是否合适,并进行优化。

        如果出现了比目的片段大的较亮条带,可能是扩增出了非特异性产物,也可能是出现了异染色体扩增。建议您重新评估引物设计和PCR反应条件,并尝试调整PCR反应条件或者重新设计引物,以避免非特异性扩增或者异染色体扩增。此外,您可以考虑通过聚丙烯酰胺凝胶电泳或者测序等方法,确定所扩增的条带的大小和来源,以便进一步优化实验条件。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        引物的问题,你选择的引物匹配度太差,建议更换引物。

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