咪唑洗脱蛋白梯度顺序错了有什么影响吗，怎么补救

应该是要重新洗脱了，没听说过有什么好的补救措施

洗脱蛋白不完全，建议重新做，减少影响。

用pbs多次冲洗，短时间内还可以补救

根据您提供的信息，如果您的实验目的是比较不同浓度的咪唑洗脱效果，那么您洗脱后得到的蛋白质样品可能不适合进行这个比较。因为您没有采用较低浓度的咪唑，所以可能有一些蛋白质没有被完全洗脱，而且一些较弱的相互作用可能已经被破坏，导致在后续的步骤中无法获得准确的结果。

如果您的实验目的不是比较不同浓度的咪唑洗脱效果，而是获得单个样品的蛋白质，那么使用200的咪唑浓度洗脱蛋白质通常可以获得较好的结果。

如果您想补救这个问题，您可以重新进行实验并按照正确的顺序使用不同浓度的咪唑，或者尝试使用其他的蛋白洗脱方法。

肯定有影响。建议重新做一下比较好。咪唑加入之后，会和蛋白争夺与Ni的结合位点，杂蛋白、你的目的蛋白，会在不同的浓度被洗脱下来。