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        pspcas9质粒能代替plko1用三质粒系统包装慢病毒吗?

        相关实验:慢病毒包装实验

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        断爱天堂


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        4 个回答

        user-title

        sswei

        有帮助

        pspcas9质粒代替plko1用三质粒系统包装慢病毒的效果较差。

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        不建议pspcas9质粒代替plko1用三质粒系统包装慢病毒。

        慢病毒包装实验建议:

        1.提高慢病毒的转染效率可以从以下三个方面:通过超速离心、PEG浓缩方法收取原液慢病毒滴度会提高;加辅助转染的试剂,如polybrene等;摸索最适合细胞的MOI。MOI(Multiplicity of Infection,感染复数)是指病毒感染细胞的比例。选择合适的MOI值,病毒的感染效率以及目的蛋白的表达量越高。


        2.通过大抽质粒,去内毒素获得高质量的质粒。


        3.包装细胞:一般建议选择细胞状态好的293T或293FT。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        在使用三质粒系统包装慢病毒时,可以选择不同的载体来搭载Cas9和其他所需的基因元件。如果你想使用pspCas9质粒代替PLKO.1载体来搭载Cas9基因,需要注意以下几点:

        确保pspCas9质粒能够在你所研究的细胞系中高效表达Cas9蛋白。pspCas9质粒不同于PLKO.1载体,需要使用其他启动子或转录因子来驱动Cas9的表达。因此,在选择载体时需要考虑到它是否能够在目标细胞系中高效表达Cas9蛋白。

        确保pspCas9质粒与其他两个质粒能够顺利地共同工作。在三质粒系统中,除了Cas9质粒外,还需要使用另外两个质粒:一个负责表达包装病毒所需的衣壳蛋白,另一个负责表达转导载体。因此,需要确保这三个质粒能够协同工作,从而实现高效的病毒包装和转染。

        需要进行实验验证。由于不同的细胞系对于基因编辑技术的应答可能会有所不同,因此需要进行实验验证,以确保使用pspCas9质粒能够实现预期的基因编辑效果。此外,在进行实验时,需要同时设置负对照组和阳性对照组,以确保结果的准确性和可靠性。

        总之,使用pspCas9质粒代替PLKO.1载体来搭载Cas9基因需要经过仔细的考虑和实验验证。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        可以代替转导,完全包装的话成功率不高。

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