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慢病毒包装/慢病毒载体/Lentivirus

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供应商信息

和元生物技术(上海)股份有限公司
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产品详情

简介: 和元可以提供高滴度的慢病毒,供不同实验需求
提供商: 和元上海
服务名称: 慢病毒包装/慢病毒载体/Lentivirus
地区: 上海
规格: TU/ml

慢病毒包装/慢病毒载体/Lentivirus

 

和元上海提供的慢病毒(Lentivirus)的生产和指控采取了国际学术界公认的标准流程,采用三质粒系统在293T细胞中进行包装。所获得的慢病毒颗粒经过超速离心纯化,并通过qPCR对慢病毒基因拷贝进行滴定。一般情况下我们生产的慢病毒滴度在108-109TU/ml,完全可以满足各类实验的使用要求。

 

慢病毒载体是一类改造自人免疫缺陷病毒(HIV)的病毒载体,基因组为RNA,对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

慢病毒基因组进入细胞后,在细胞浆中反转录为DNA,形成DNA整合前复合体,进入细胞核后,DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录成mRNA,回到细胞浆中,表达目的蛋白;或产生小RNA。慢病毒介导的基因表达或小RNA干扰作用持续且稳定,并随细胞基因组的分裂而分裂(图1)。

慢病毒作用机制

慢病毒包装和感染过程

慢病毒与腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒载体相比,具有宿主范围广,免疫原性低,基因容量大,可以长期表达等特点。慢病毒包装主要用于难转染细胞的感染,稳转株的制备,神经系统的定位注射实验。难转染的细胞主要包括干细胞、免疫细胞(如DC细胞)、肿瘤细胞等,此外,慢病毒还可以感染仓鼠胚胎制备转基因动物。

 

慢病毒感染细胞时,由于细胞的来源、代数和细胞状态等因素的影响,MOI值在不同实验室也略有差异,下面我们提供公司部分细胞的慢病毒MOI感染参数,供实验参考(以下数据是细胞感染效率在80%细胞状态良好的情况下获得的):

 
表1 不同细胞的MOI值参考
细胞名称 细胞来源 MOI值
A-375 人恶性黑色素瘤细胞 10
A549 人肺腺癌细胞 10
PANC-1 人胰腺癌细胞 10
NCI-H1299 人肺腺癌细胞 10
Saos-2 人骨肉瘤细胞 10
MDA-MB-231 人乳腺癌细胞 40
SW620 人结肠癌细胞 40
T24 人膀胱癌细胞 20
Ca Ski 人宫颈癌肠转移细胞 10
MG-63 人骨肉瘤细胞 50
 

慢病毒的感染特点除了感染细胞类型广以外,慢病毒还具有体内外同时使用、表达起始时间短、基因容量比较大等特点,常用于神经、肿瘤、转基因动物制备等,目前也较为被广泛使用。

慢病毒感染案例  

慢病毒UbiC-EGFP感染胚胎细胞构建转基因仓鼠

病毒相关技术服务:

病毒包装服务     腺相关病毒包装     慢病毒包装    腺病毒包装     逆转录病毒包装

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产品简介:慢病毒( Lentivirus )载体是以 HIV-1 (人类免疫缺陷1型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体, 属于逆转录病毒科,为 RNA 病毒。区别于一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达。目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。由于体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的,因而使其应用受到较大的限制。基于慢病毒载体设计的 shRNA , 转移到细胞内转录 siRNA 的策略,不但使有效转染的细胞种类增加,而且长期稳定抑制目的基因在细胞中表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型细胞,从而达到良好的基因治疗效果,在美国已经开展了临床研究,效果非常理想,因此具有广阔的应用前景。吉满主要提供高质量的慢病毒(高滴度、高纯度),应用于临床前细胞学实验和整体动物实验的针对不同基因和药物靶标的各种即用型病毒颗粒。 过表达慢病毒包装 RNAi 慢病毒包装 miRNA 慢病毒包装 稳定细胞株构建服务技术特点:慢病毒载体包装之后成为假病毒颗粒后,可用于: 非常难转染的细胞,例如神经元细胞、原代细胞、干细胞、肿瘤细胞等,针对这类细胞慢病毒载体的转染效率接近 100%; 构建稳定表达或者沉默特定基因的单克隆细胞株; 活体动物模型(in vivo)的基因操作; 可调控表达,经过特定的元件修饰的慢病毒表达载体,可实现只有在特定的外源或内源物质的作用下才能产生表达,从而调控目的基因的定时、定量表达。吉满优势: 先进的慢病毒包装技术 丰富的细胞培养经验 专业的技术服务团队 一流的服务质量其它相关服务: 基因克隆 腺病毒、腺相关病毒 CRISPR/Cas9 服务 报告基因专题CRISPR/Cas9服务CRISPR/Cas9服
慢病毒Lentivirus 实验原理慢病毒属于逆转录病毒科,名称源自该种病毒长达数年的潜伏期,其中最为人所知的是人类免疫缺陷病毒(HIV-1)。HIV-1直径约120nm,含两条正链RNA,可有效的进入细胞核中,对分裂期细胞及非分裂期细胞均具有很高的感染效率。对以HIV-1为基础进行的慢病毒载体的改造,主要是去除致病基因减少辅助质粒与载体质粒的同源性,最终体现在滴度、生物安全性和外源基因表达效率上的提高,见结构示意图。慢病毒包装系统特点:可通过顺式作用元件将携带的基因运送到细胞核,将要表达的基因序列整合到细胞基因组中,后续可以通过筛选稳转株获得持续稳定的高表达。实验流程 病毒提供规格    客户提供 病毒规格 提供量 赠送阴性对照 实验周期 过表达慢病毒 过表达基因NCBI登陆号及含该基因的质粒载体、测序报告 低滴度10^5-10^6 TU/ml 10 ml 2 ml 2周 高滴度10^7-10^8 TU/ml 1 ml 0.2 ml 3周 干扰慢病毒 待干扰基因的NCBI登陆号及靶点序列信息 低滴度10^5-10^6 TU/ml 10 ml 2 ml 2周 高滴度1-3*10^8TU/ml 1ml 0.2 ml 3周   实验结果展示 
慢病毒系统介绍    慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1(人类免疫缺陷I型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体(RNA类病毒)。可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞。对于一些较难转染的细胞, 如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,使用慢病毒载体,能大大提高目的基因或目的shRNA的转导效率。     慢病毒基因组进入细胞后,在细胞浆中反转录为DNA,形成DNA整合前复合体,进入细胞核后,DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录成mRNA,回到细胞浆中,表达目的蛋白;或产生小RNA。慢病毒介导的基因表达或小RNA干扰作用持续且稳定,并随细胞基因组的分裂而分裂。能够快捷地实现目的基因或目的shRNA的长期、稳定表达。 产品优势 操作简便,感染效率高 对分裂期和不分裂期细胞均可感染 可稳定遗传表达 多种现货载体选择
产品简介       慢病毒(Lentivirus)载体是以 HIV-1 (人类免疫缺陷1型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点,因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。 整体实验流程 (一) 实验流程(1、2、3为并列步骤)       1. 慢病毒过表达质粒载体的构建 设计上下游特异性扩增引物,同时引入酶切位点,采用PCR技术(采用高保真KOD酶,3K内突变率为0%)从模板中(cDNA质粒或者文库)调取目的基因CDS区(coding sequence)连入T载体。将CDS区从T载体上切下,装入慢病毒过表达质粒载体。      2. 慢病毒干扰质粒载体的构建 合成siRNA对应的DNA颈环结构,退火后连入慢病毒干扰质粒载体。      3. miRNA载体构建从 Genomic 中调取基因相应的Mir 前体, 并在调取引物中引入酶切位点。      4. 慢病毒载体的包装与浓缩纯化 制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒(两质粒包装系统),三种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提,共转染293T细胞,转染后6 h 更换为完全培养基,培养48和72h后,分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,病毒上清液通过超离心浓缩病毒。 (二)流程图   提供产品  产品名称 病毒滴度 规格 赠送阴性对照病毒规格 过表达慢病毒 >10^8 PFU/ml 1ml 1ml(>10^8 PFU/ml) 干扰慢病毒 >10^8 PFU/ml 1ml 1ml(>10^8 PFU/ml) kesciencekescience-001

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