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        慢病毒转染后48h上清比72h黄是怎么回事?

        相关实验:慢病毒包装实验

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        每天解决新问题

        求各位大神救救科研小白!!如题,我用293t进行慢病毒转染后收两次上清,48h收一次,72h收一次。近期做实验48h上清都比72h黄(48h)。之前听实验室老师说48-72h是产毒的高峰期,应该72h收的更黄,不清楚是出了什么问题。之前按同样步骤操作,48h的上清呈橙红色,72h是黄色,现在颜色完全相反了,真的很费解。

        补充:293t是传代2-3次的,包装用的工具质粒是pspax2和pMD2.G,转染后8h换液。转染48h和72h后细胞均无明显漂浮,皱缩现象,实在不知道怎么回事

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        6 个回答

        user-title

        汤姆卜丽波

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        不是说24-48是高峰期么,你收了之后要合并的吧只要不影响后面实验就可以啊

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        土井挞克树

        有帮助

        可能与你的细胞状态有关,细胞状态差的话确实前期会黄一些。

        user-title

        每天解决新问题user-title

        感谢回答!如果是细胞状态的问题应该如何解决呢?还是说这批293t就不能继续用来包病毒了?

        user-title

        此用户已注销

        有帮助

        细胞转染过程细胞皱缩,说明细胞稳态发生变化,可能是磷酸钙浓度过高,我们经常用氯化钙处理感受态,增加细胞膜的通透性,或是说增加细胞壁的通透性,42°热激,增加转化的效率,其实是钙离子的影响导致,也就是说磷酸钙在转染的过程中,引起细胞的内环境发生变化,细胞皱缩

        至于转染24h后,细胞恢复,你换液之后,去除钙离子,细胞调节,正常生长,恢复生理活性

        培养基变黄,培养基一般含有酚红等酸碱指示剂,如果变黄,PH<7,偏酸。

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        loveliufudan

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        你描述的情况非常奇怪,确实需要进一步调查。在传代培养中,细胞状态和培养条件可能会发生变化,导致病毒产量的变化。以下是一些可能的原因和建议:

        1.细胞质量问题:细胞在传代过程中可能出现基因突变、损伤或其他问题,导致病毒感染效率降低。可以使用细胞培养中的常规检测方法(如细胞形态、凋亡、周期和细胞增殖)来评估细胞质量。

        2.培养条件问题:病毒感染效率可能受到培养条件的影响,如温度、湿度、氧气浓度、pH值等。可以检查培养条件是否符合细胞培养的标准要求。

        3.转染问题:转染前后的细胞数量、转染方法和转染时间可能会影响病毒感染效率。可以重新检查你的转染方法,确保细胞数量、转染时间和转染方法都正确。

        4.病毒株问题:病毒株可能会发生变异或突变,导致病毒产量变化。你可以使用病毒株鉴定方法(如PCR,ELISA,病毒基因组测序等)来验证病毒株的纯度和稳定性,确保使用的病毒株是合适的。此外,你可以尝试使用其他病毒株进行比较,以确定是否存在病毒株问题。


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        huarenqiang5

        有帮助

        考虑培养基pH值过低、过酸导致。

        user-title

        每天解决新问题user-title

        感谢回答!请问ph过低是怎样造成的呢,是跟细胞出毒量相关还是培养基本身出了问题?需要更换培养基吗?

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        正常是48h的时候收一次换新鲜培养基,第二天也就是72h再收,72h的这批培养基只用了24h肯定没有第一次收的黄。

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