求问如何做跨膜蛋白和胞质蛋白互作的coip？
dxy_dgr001
我想做一个跨膜蛋白和胞质蛋白的coip，验证它们在不同状态下的互作关系（它们的互作已经确定了，多有文献报道），但是我一直拉不到它们的互作，文献也没有特殊说明，感觉都是普通的ip实验。后来听说可能需要分离膜蛋白再做？请问怎么做？分离了膜蛋白怎么去把胞质的也一起分离呢？有具体的操作方法吗？
4 个回答
朱令懿
有帮助
请问楼主解决了吗，我最近也在做这个种跨膜蛋白coip实验做不出来！
汤姆卜丽波
有帮助
只需要分离膜蛋白，胞质蛋白不用分离出来，然后按照普通coip的流程做就可以了
dxy_dgr001
请问，胞质蛋白不分离怎么检测到ip的胞质蛋白呢
balalaLy
有帮助
不用分离膜蛋白吧，有没有排除一下你的ip过程有没有哪步有问题？抗体、裂解液合不合适？
dxy_dgr001
具体怎么排出这些问题呢？我试了好几次了，但是一直做不出来，就是按照protocol来的
bamboopiggy
有帮助
就是普通的coip就可以啊，如果你拉不下来，试试调整一下buffer中的去污剂浓度。别用sds，用triton或者是np40
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