Western blot实验时背景高且不均匀怎么办？

封闭物用量不足，提高封闭浓度，使用适当体积保证孵育时完全覆盖。

转印膜封闭物使用不当，检测生物素标记的蛋白时，不可用脱脂奶封闭。

封闭的时间不够，延长封闭时间，抗体非特异性结合减少，抗体的浓度和孵育时间抗体浓度过高或洗涤不彻底，降低抗体浓度，增加洗涤时间和次数化学显色底物过多减少显色底物用量

可能有几个原因，一个是你的封闭时间不够，你延长一下看看。二个是你的抗体浓度太高了，稀释一下看看。

背景高，可能是你的抗体浓度高，试着降低一下抗体浓度，也可能是抗体没洗干净，可以用TBST多洗几次，洗久一点。不均匀，是样品问题，盐浓度过高，电泳的时候先小电压跑15min，再调到80V电泳。