每次做wb都是黑乎乎一片

WB中出现黑色的背景可能是由多种因素导致的。下面是一些可能的原因：

1.过量的抗体：使用过量的抗体可能会导致非特异性结合，从而导致高背景值。

2.不当的洗膜条件：使用过于粗糙或过于缓慢的洗膜步骤可能会导致高背景值。

3.抗体过时或受损：过时或受损的抗体可能会导致高背景值。

4.蛋白质降解：样品中蛋白质降解可能会导致高背景值。

5.膜过于湿润： 膜过于湿润可能会导致高背景值

6.检测抗体非特异性结合: 分子量12KD的蛋白质如果检测的抗体不是特异的，可能会有非特异性结合导致黑色背景。

建议检查你的实验步骤，并确保使用新鲜的、特异性较好的抗体，并且调整洗膜条件。

分子量比较小，用15%的胶，不要跑太下。其次就是封闭、一抗、二抗的浓度和时间。

考虑以下几点：

1.脱脂奶来源和批次不同，溶解时需要耐心，但有些颗粒还是难以完全溶解，如果不经处理，就会产生颗粒。

2.二抗溶液存放过程中也容易产生不溶物。简单的解决方法是封闭剂和二抗在使用前用Millex®针头过滤器进行过滤，去除颗粒物。

3.可能是牛奶有渣，没封闭好。