WB实验跑出来的目标条带信号很弱是怎么回事
墨幽染染
6 个回答
天一湖医者
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样本上样量不足，或者蛋白浓度过低，
青柠清心
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提取蛋白质过程中，应在低温环境下进行，以抑制蛋白酶的水解作用（可加入适合的蛋白酶转移不完全或过转移，可以用丽春红染膜并结合染胶(考马斯亮蓝)后确定条带是否转至膜上或转移过头；适当调整转膜的时间和电流抑制剂）。
一抗孵育时间不足，建议4℃结合过夜，或者是由于二抗与一抗不匹配，选择针对一抗来源的种属的抗体。
洗膜过度，洗膜时间不宜过长，加入的去垢剂不宜过强或过多，建议使用0.1%的弱去垢剂Tween-20。
Eason老歌迷
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有几个原因，一个是可能它本来表达量就很少，或者是你转膜的时候没转上。
养点鱼吃火锅
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(1) 蛋白上样量不足
增加上样量。
(2) 样本中不含目标蛋白
设置阳性对照以确定样本中是否含目标蛋白。
(3) 封闭过度
选用合适的封闭液，缩短封闭时间。
(4) 抗体问题
抗体的检测效力太低或失效，或者一抗与组织种属，一抗与二抗或/和底物与酶系统之间不匹配，换合适的抗体，通过设置对照验证检测系统是否有效。
另外可以增加抗体浓度，延长孵育时间，提高孵育时的温度以改善条带。
(5) 酶失活
直接将酶和底物进行混合，如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物。
(6) HRP抑制剂干扰
如果使用含有叠氮钠的一抗，在一抗孵育后应充分洗膜，之后所用溶液和容器中应避免含有叠氮化钠。
(7) 曝光时间过短
延长曝光时间。
秋秋欣欣
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那可能是你的目的蛋白表达量低，可以增大上样量
申东熙老伯
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是这种的话我怀疑你的目的条带是不是和理论不符，上面的才是目的条带…
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