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        为什么其他方式能验证出两个蛋白之间有相互作用,用Co-IP却没有验证出来?

        相关实验:免疫共沉淀(Co-IP)

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        dxyjonas

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        3 个回答

        user-title

        whilt-shirt

        有帮助

        首先确定两个蛋白到底有没有相互作用。可以结合酵母双杂交,LUC或者其他的实验结果。

        在其他实验验证有互作的情况下,调整COIP 条件。看来你的步骤,其中孵育的时间两个overnight,太长了如果某个蛋白不稳定你这两三天的实验蛋白就降解了,加抗体后2h,加proteinG beads再4h就可以了,不需要太久。另外完全可以适应标签抗体偶联好的商业化Flag beads or HA beads, 这样可能富集效果会更好。

        另外wash buffer 建议不要用PBS,是会被质疑的。可以用低盐离子浓度的Tris buffer代替

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        Co-IP可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质 相互作用。两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用!

        user-title

        dxyv9281

        有帮助

        Co-IP是验证蛋白之间相互作用的经典方法,但是有一定的灵敏度,对于有些弱相互作用或由于蛋白表达量太低而检测不出来的,属于正常范畴。

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