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        如何选择凝胶,以及层析柱?

        相关实验:蛋白质的层析纯化

        user-title

        luckycan

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        4 个回答

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        lyang556

        有帮助

        要根据实验目的不同选择不同型号的凝胶和层析柱。

        1.分离样品中的大分子物质和小分子物质,可选用Sephadex G-25和G-50,多采用2-30cm长的层析柱。

        2.分离样品中一些分子量比较近似的物质,可选用排阻限度略大于样品中最高分子量物质的凝胶。需要100cm左右长的层析柱,且直径在1-5cm范围内最佳。

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        迟C迟

        有帮助

        1.测定------分子量、PI
        当目标蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚时,可用PAGE电泳方法或层析方法加以测定。分离范围广阔的Superose HR预装柱很适合测定未知蛋白的分子量。用少量离子交换介质在多个含不同PH缓冲液的试管中,可简易地测出PI,并选择纯化用缓冲液的最佳PH。
        2.选择------层析方法

        若对目标蛋白的特性或样品成分不太了解,可尝试几种不同的纯化方法:

        [一] 使用最通用的凝胶过滤方法,选择分离范围广阔的介质如Superose、Sephacryl HR依据分子量将 样品分成不同组份。

        [二] 用含专一配体或抗体的亲和层析介质结合目标蛋白。亦可用各种活化偶联介质偶联目标蛋白的底物、受体等自制亲和介质,再用以结合目标蛋白。一步即可得到高纯度样品。

        [三] 体积大的样品,往往使用离子交换层析加以浓缩及粗纯化。高盐洗脱的样品,可再用疏水层析纯化。疏水层析利用高盐吸附、低盐洗脱的原理,洗脱样品又可直接上离子交换等吸附性层析。两种方法常被交替使用于纯化流程中。

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        bqejjh123

        有帮助

        层析柱的选择一般根据分离样品的种类而定。纯化蛋白质时,柱床体积应为样品体积的 25~100 倍;而除盐或除游离荧光素时,柱床体积约为样品体积的 4~10 倍。层析柱太短会影响分离效果,如太长会延长分离时间和过度稀释样品。层析柱的内径过细会发生「器壁效应」。层析柱的内径和高度有一定的比例,除盐柱应为 1:5~1:25,纯化蛋白质柱应为 1:20~1:100。

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        bamboopiggy

        有帮助

        根据你的实验目的,你要纯化蛋白的大小,去公司的网站上,看说明书。

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