WB的内参一直做不齐是什么原因？

相关实验：蛋白质免疫印迹(Western Blot，WB)

呜咽

2013-08-22

WB的内参一直做不齐，123456共六个lane，1,4上样6ul就有很亮的条带，2,3和5、6lane上样从8ul、10ul、13ul、15ul到20ul一直加上去都完全出不来条带是什么原因？可是我把2、3和5、6的样品拿出来单独上样（与1、4lane的样品分开上样），上样量15ul竟然出现了很亮的条带，这是什么原因，是抗原抗体的比例不适合的原因吗？

3 个回答

应用场景

2017-10-15

有帮助

不同样品选用内参要注意考察，有些内参蛋白会随着发育阶段，体内环境等因素而变化。考虑用总蛋白作为均一话标准是行之有效的方法。

张振1986

2013-08-23

有帮助

你的这个问题是非常常见的，就算在实验室专业做WESTERN的人员，也会遇到内参不齐的问题。单独上样可以出现，可以排除蛋白本身的问题，但混合一起加时却跑的不齐，最大的可能就是胶的问题，胶配的不均匀导致蛋白跑的不在同一水平。在就是抗体孵育问题，不知你是用孵育盒，还是用封膜孵育，一定要保证膜与抗体充分接触，保证孵育效果。三是显影剂是预混还是混合好的，注意混合比例，祝楼主早日跑出理想的条带。