Western及IP细胞裂解液，无抑制剂，阿拉丁

产品介绍：

Western及IP细胞裂解液（Cell Total Protein Lysate for Western Blotting & Immunoprecipitation）是一款较为常用的，针对免疫沉淀实验的蛋白裂解液。所采用的提取方法较为温和，所获得的蛋白质可用于Western Blot、免疫沉淀和免疫共沉淀等。
使用方法：
 (一)贴壁培养细胞1.取本品置于室温溶解混匀，根据实验要求加入酶抑制剂。2.去除贴壁细胞的培养液，用 PBS、NS 或无血清培养液清洗1次，低速离心，弃上清，留取沉淀。3.按照 6 孔板每孔加入150～250μl 含有酶抑制剂的裂解液的比例，加入本品。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或 4℃裂解，通常裂解液作用于细胞 1～3s 内，细胞就会被裂解。通常 6 孔板每孔细胞加入 150μl 裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200～250μl。4.10000～12000g，4℃离心 5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。5.后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。(二)悬浮培养细胞1.取本品置室温溶解混匀后，加入酶抑制剂。2.低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。3.用手指轻弹细胞，使其松散。按照 6 孔板每孔细胞加入150～250μl含有酶抑制剂的裂解液的比例，加入本品。通常 6 孔板每孔细胞加入 150μl 裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200～250μl。再用手指轻弹以充分裂解细胞，充分裂解后应没有明显的细、胞沉淀。4.10000～12000g，4℃离心 5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。5进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。(三)组织样本1.取本品置于室温溶解混匀后，加入酶抑制剂。2.把组织剪切成细小的碎片，越小越好。3.取在液氮或超低温冰箱中冷冻 30min 以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控制在1～2min 之内，以减少蛋白的降解。4.按照每 20mg 组织加入 150～250μl 裂解液的比例，加入含有酶抑制剂的裂解液。冰上或4℃裂解 15～30min。5.步骤 3、4 亦可以采用如下过程：按照每 20mg 组织加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有酶抑制剂的本品。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆，直至充分裂解，该过程尽量控制在 1～2min 之内，以减少蛋白的降解。6.10000～12000g，4℃离心 5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。7.进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。注意事项 1.去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。2.如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。3.如果细胞量较多，必需分装成 50～100 万细胞/离心管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。4.如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈 Vorte× 使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。5.在低温情况下有可能出现浑浊现象，可 37℃水浴促其溶解，不会影响使用效果；溶解时间不易过长，避免有效成分失效。6.裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。7.细胞裂解的操作步骤，应置于冰上或 4℃进行。
使用范围：
适用于一般生物学及医学研究