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WB:350kDa的大分子怎么跑
balalaLy
转膜时间可能不够,我跑200的蛋白用7.5%的胶跑3小时还不够
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问
(细胞焦亡)为什么wb做活化caspase-1大多在上清中做?
土井挞克树
考虑是上清中含有活化所需蛋白。细胞裂解中也有,但是大部分存在于上清
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问
大鼠组织跑WB,结果很难看
麻黄连翘赤小豆
非特异性条带很多,奶粉也没有融化完全,也可能是胶的配比问题
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问
关于组织提蛋白
balalaLy
可能有部分蛋白会已经降解,毕竟RNAlater主要针对的是RNA 酶
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问
提蛋白问题
申东熙老伯
可以的,裂解液是要把细胞裂解了,在超净台配是担心污染细胞,细胞都裂解了就不怕污染。
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问
胰腺组织做WB
balalaLy
可能是你提取的过程有问题,可以用液氮研磨的方法快速裂解组织,后续的过程跟常规流程一样,免疫荧光也是。
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问
冻干后粉末的收集
麻黄连翘赤小豆
你把需要冻干的放在你准备的管子里,到时候冻干好了不需要再挑出来,直接要用的时候抖点出来称
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问
wb内参
balalaLy
放到文章里是肯定要有内参的,比值是看两个的就可以
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问
慢病毒很难感染成纤维细胞吗
bamboopiggy
你最好自己做一个moi,实在不行可以用腺相关病毒。
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问
两种不同慢病毒可以同时感染一个细胞吗?
养点鱼吃火锅
可以,最好是先感染一种,等筛选稳定后,再感染另一种。对细胞伤害低一些。
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问
两种不同的慢病毒可以同时感染细胞吗?
bamboopiggy
你最好先做成敲低的,再做过表达的,否则你怎么筛你要的目的细胞。
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问
请问各位大佬,GPX4和keap1相比,那个用wb检测更好跑一些呢?做小鼠肾组织的。
土井挞克树
一般来说GPX4用的多一些,尤其是肾组织
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问
为什么RNA的丰度很高,蛋白印迹检测的是下降
麻黄连翘赤小豆
基因表达比较灵敏,蛋白表达不明显蛋白降解多测几次,也许就是会存在基因和蛋白表达相反的情况
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问
关于无血清冻存液问题咨询
麻黄连翘赤小豆
快捷的冻存液本来也不能保证细胞不变异,一般都用血清和培养基会比较好
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问
最近在做某蛋白的入核。提了质核分离蛋白跑WB,发现这个蛋白在质里少了,在核里也少了。请问大家这是为什么?
申东熙老伯
蛋白在细胞的表达量有很多未知的变化,你的细胞有经过准确的计数吗?
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问
请问keap1和Nrf2那个wb检测更好跑?
bamboopiggy
只要你抗体买的好,样品处理好,哪个都好跑
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问
wb背景高,内参不齐
balalaLy
细胞死了蛋白也降解差不多了,所以内参不齐主要还是因为细胞死亡。可以剔除这个浓度了。那两个黑点应该是杂点,脏了。
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问
谷蛋白改性?谷蛋白想做一个纳米粒子,用于包埋一些活性物质,有什么办法可以使其溶解
汤姆卜丽波
可以改变溶液里的酸碱度和外界温度都可以增大溶解度
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问
SDS page为什么分离胶有一条线,样品也下不去
balalaLy
看marker是正常跑开了,蛋白跑不下去应该不是胶的问题,估计是loading的问题,或者是你的蛋白降解了。
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问
WB踩雷之路
bamboopiggy
能找到错误就ok,最怕的是做不出来,还找不到哪里错了。
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