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科研学霸天团，48小时有问必答

问酵母双杂交实验

生命之星VIP

通过两个杂交蛋白在酵母细胞中的相互结合及对报告基因的转录激活来捕获新的蛋白质，1. 构建重组Activation Domain（AD）融合的重组质粒（pGADT7载体）以及Binding Domain（BD）融合的重组质粒（pGBKT7载体）；2.双向酵母双杂交实验鉴定蛋白质间的相互作用

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问LPO MDA检测

huarenqiang5

建议你把浓度提高做一下试试看。

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问wb实验求救

bamboopiggy

没看到图，反正就是你的蛋白没有出来，1，如果别的条带出来了，说明你的蛋白没有问题。2，如果别的条带也出不来，说明你提的蛋白有问题。至于是不是抗体问题，最好是看看别人用没用过吧

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问请问各位大佬。这种WB双条带应该怎么跑呢，

balalaLy

条带大小相差不大，你是要区别看两条条带的话可以用12-15%的胶跑，分得开就行。

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问请问为什么跑western曝光出来的条带和丽春红染色显示出来的条带不一样呀？

bamboopiggy

丽春红带负电荷，可以与带正电荷的氨基酸残基结合，同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合，从而形成红色的条带。但是它没法特异性的识别你的目的蛋白，如果你用wb杂不出来，说明还是你的抗体不特异

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问大肠杆菌外源蛋白表达。

dxy_0mli503w

确实是要先测序的，一般来说实验室做好之后都会先送给公司帮忙测序，得到序列之后自己先分析一遍，是否与设计组有偏差，正反双链是否有问题，引物启动子序列表达是否有问题，确定了这些之后才会进行下一步。

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问蛋白纯化

loveliufudan

如果质谱检测结果显示聚合物过多，无法确定目的蛋白的分子量，可以尝试以下方法去除聚合物：1.增加蛋白质水解步骤。在发酵液中增加蛋白质水解步骤可以切断蛋白质的聚合物，使得质谱检测更加准确。2.使用蛋白质纯化技术。可以使用蛋白质纯化技术，如柱色谱、电苯胺凝胶等，去除蛋白质中的聚合物。3.使用蛋白质剪接酶。可以使用蛋白质剪接酶，如热心菌肽酶、信使RNA酶等，去除蛋白质中的聚合物。4.使用离子交换层析。离子

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问EMSA

huarenqiang5

EMSA可以用包涵体获得的蛋白来做。

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问请问想过表达一个膜蛋白，插入了flag，测序正确，但WB显示空白对照也都有条带是为什么

囧G5NI

你好，请问你们已经解决了吗，我们也有相同的问题了

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问有没有知道为什么tet-on系统泄露表达的

土井挞克树

没起作用是不是引物有问题，更换引物试一下

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问多肽纯化时多大浓度的乙腈都不溶

loveliufudan

1.使用其他溶剂。乙腈不能溶解多肽，可以尝试使用其他溶剂，如甲醇、丙酮或丁酮。2.增加温度。在升高温度的情况下，多肽的溶解度可能会增加，这样就可以在更高的乙腈浓度下溶解多肽。3.使用更低浓度的乙腈。如果90%的乙腈都无法溶解多肽，可以尝试使用更低浓度的乙腈。4.使用超声波。使用超声波可以提高多肽在乙腈中的溶解度。5.改变 pH 值。改变 pH 值可以影响多肽的电荷，从而改变其溶解度。有时使用上述方

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问trizol提蛋白后怎么稀释？

bamboopiggy

BCA法可以兼容5%的sds，所以你这一步测蛋白浓度没问题，然后8ug到2ug，你可以用dd水稀释，然后再加5Xloading

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问17kda 小分子量蛋白WB条带求助！

balalaLy

看你的电泳条件应该是跑太下了。一般上层胶80v 20min，下层胶120v 50min

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问BCA测蛋白浓度的标曲是怎么做的？

你好几和户

用梯度浓度的标准品测出的吸光度做出的曲线就是标准曲线。这个曲线的方程可能是y=ax+b, 或y=ax^2+bx+c,也可能是更复杂的方程，其中y是浓度，x是OD值。你做样本，用酶标仪得到OD值（x），然后根据标准曲线方程，就能计算出浓度（y）。

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问脂肪组织HE染色的细胞

土井挞克树

右上角是脂肪细胞，右下角是炎症细胞。

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问蛋白相互作用结合区段

土井挞克树

可以通过研究蛋白上游的mrna来区别结合区段

1 回答366 围观

问HELA细胞做EMT相关问题

土井挞克树

做EMT相关蛋白可以不跑E-ca，试一下用免疫荧光代替。

1 回答415 围观

问蛋白互作

ssjepfqf

了解两种蛋白之间是否存在相互竞争关系

3 回答576 围观

问组织取出来之后不能马上做wb，是先提蛋白煮样之后冻负80，还是直接把组织冻在负80？

huarenqiang5

可以直接放-80，不过要避免多次反复冻融。

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问一篇紧急求助贴

dxyc42u

可以去PubMed搜搜外文文献报道

3 回答336 围观

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